碧蘿芷在大鼠脊髓損傷后的神經(jīng)保護作用.pdf

1、目的:脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）是脊柱骨折最嚴(yán)重的并發(fā)癥，導(dǎo)致?lián)p傷平面以下運動和感覺功能喪失，出現(xiàn)嚴(yán)重的功能障礙，給患者的身心以及社會帶來巨大的負(fù)擔(dān)，隨著我國交通和建筑業(yè)的發(fā)展，SCI的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢。SCI后的病理生理機制復(fù)雜，臨床治療效果非常有限，這使得脊髓損傷的治療成為臨床和科研所面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)之一。本課題將從脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞損傷的病理生理機制入手，尋找新的治療靶點、探索新的藥物以便為將來臨

2、床改善脊髓損傷后運動感覺功能的恢復(fù)奠定一定的基礎(chǔ)。
　　研究方法:本課題利用SD大鼠作為實驗對象，采用改良Allen's法（背側(cè)撞擊法），建立脊髓損傷的動物模型。碧蘿芷(PYC)是一種從法國沿海松樹皮中提取的天然黃酮類化合物，具有很強的抗氧化作用。已有多個實驗證實，天然黃酮類化合物能夠通過清除氧自由基并調(diào)節(jié)多種細(xì)胞內(nèi)信號通路對機體的各個器官起到保護作用并且能夠通過血腦屏障作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。本次試驗是在大鼠脊髓損傷后15分鐘通過腹

3、腔給予一定劑量的藥物予以保護，觀察其療效。利用HE染色及尼氏染色檢測PYC對于脊髓損傷后組織及神經(jīng)細(xì)胞的保護作用。BBB評分檢測PYC是否能夠促進(jìn)大鼠脊髓損傷后后肢運動功能的恢復(fù)，比色法檢測脊髓損傷后72h PYC對于氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD，MDA的影響。IHC定位檢測和Western Blot定量檢測凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-Caspase3、bcl-2、bax的表達(dá)，判斷細(xì)胞凋亡情況及PYC的抗凋亡作用。為了進(jìn)一步探討PYC是否抑制了

4、線粒體凋亡通路，我們使用JC-1熒光探針及流式細(xì)胞儀分析了脊髓損傷后72h線粒體膜電位(△Ψm)的變化并通過Western blot檢測胞漿內(nèi)Cyt-c的表達(dá)。
　　結(jié)果:HE染色及尼氏染色證實了PYC對于脊髓損傷后的組織及細(xì)胞具有保護作用。Basso-Beattie-Bresnahan評分證實了PYC改善了脊髓損傷后大鼠后肢運動功能。通過比色法我們觀察到PYC減少了脊髓組織中MDA的生成并提高了SOD的活性，這說明PYC減輕了脊

5、髓損傷后的氧化應(yīng)激損傷。脊髓損傷后，活化的自由基攻擊線粒體膜，大量Ca2+流入導(dǎo)致線粒體腫脹，膜電位MMP降低，從而導(dǎo)致線粒體膜破裂，細(xì)胞色素C釋放入胞漿，激活線粒體凋亡通路，最終導(dǎo)致神經(jīng)元發(fā)生凋亡。通過IHC和Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)PYC能夠下調(diào)凋亡蛋白Cleaved-Caspase3，Bax表達(dá)，上調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，此外，PYC還提高了SCI后線粒體膜電位，減少了胞漿內(nèi)Cyt-c的表達(dá)。
　　結(jié)論:作為天然抗氧