復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方及其活性成分對HepG2胰島素抵抗細(xì)胞模型NF-κB通路的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　胰島素抵抗是滋生糖尿病、高血壓、冠心病等多種代謝性相關(guān)疾病的共同土壤。中藥復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方（FTZ）已經(jīng)被用于治療和改善高脂血癥、動脈粥樣硬化等一系列代謝相關(guān)疾病。前期研究證明 FTZ可以有效改善高胰島素誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞的胰島素抵抗癥狀。女貞子作為FTZ中的主要藥物，具有治療高脂血癥和動脈粥樣硬化的作用；其主要有效活性成分齊墩果酸（OA）亦有一定的改善胰島素抵抗的作用，但是具體作用機(jī)制尚不清楚。
　　目的：

2、r>　　觀察 FTZ及其方中主要活性成分齊墩果酸對胰島素抵抗 HepG2細(xì)胞的作用，并從對核因子κB（NF-κB）—胰島素受體底物1（IRS1）—葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)受體4（GLUT4）的蛋白表達(dá)的影響，探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　采用游離脂肪酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞使其產(chǎn)生胰島素抵抗，用高中低三個(gè)劑量的FTZ干預(yù)后，用葡萄糖氧化酶法檢測HepG2細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中葡萄糖的含量，用ELISA檢測HepG2細(xì)胞培養(yǎng)液中腫瘤壞死因子-α

3、（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6)的含量，用Western blot檢測HepG2細(xì)胞中NF-κB、IRS1、GLUT4的蛋白表達(dá)。并采取NF-κB的特異性抑制劑PDTC對其進(jìn)行阻斷，再檢測下游靶點(diǎn)IRS1的蛋白表達(dá)變化。用葡萄糖氧化酶法檢測FTZ方中重要藥材女貞子及其有效活性成分齊墩果酸對胰島素抵抗的作用效果，并選取齊墩果酸進(jìn)行上述靶點(diǎn)的檢測，探索齊墩果酸改善游離脂肪酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗 HepG2細(xì)胞的作用機(jī)制。
　　結(jié)

4、果：
　　模型細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中葡萄糖含量高于正常細(xì)胞（P<0.01）。給予FTZ或OA后，HepG2細(xì)胞培養(yǎng)液上清液葡萄糖含量低于模型組葡萄糖含量（P<0.05）；HepG2細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中TNF-α和IL-6的含量較模型組降低（P<0.05)；同時(shí)較模型組相比下調(diào)NF-κB的蛋白表達(dá)（P<0.01)，上調(diào)IRS1的蛋白表達(dá)（P<0.01)和GLUT4的蛋白表達(dá)（P<0.01)。在阻斷NF-κB之后，再加入FTZ或OA，IRS