CYP2C9突變等位基因檢測及重組原核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建.pdf

1、目的：
　　建立檢測CYP2C9*14、CYP2C9*25、CYP2C9*26、CYP2C9*30、CYP2C9*33五個等位基因的方法，調(diào)查這些等位基因在廣東人群的分布頻率。并以 CYP2C9*16為例，建立CYP2C9突變等位基因體外表達(dá)的方法，為進一步研究其功能奠定基礎(chǔ)，以期為從基因水平指導(dǎo)廣東患者使用CYP2C9底物藥提供依據(jù)。
　　方法：
　　運用ACRS-PCR-RFLP法，對DNA樣品進行CYP2C9基因

2、分型；運用生物信息學(xué)軟件對 CYP2C9突變體基因編碼酶蛋白的結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)改變進行預(yù)測；以CYP2C9野生型基因為模板，通過重疊延伸PCR技術(shù)獲得CYP2C9*16突變基因序列，克隆至pET-32a原核表達(dá)載體進行體外誘導(dǎo)表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1．在532例DNA樣品中，檢測到的CYP2C9*14、CYP2C9*26、CYP2C9*30、CYP2C9*33突變等位基因的頻率分別為0、0.1％、0.1%、0。在288例DN

3、A樣品中，檢測到的CYP2C9*25突變等位基因的頻率也為0。生物信息學(xué)分析表明：CYP2C9*14、CYP2C9*26、CYP2C9*30、CYP2C9*33酶蛋白的物理性質(zhì)及空間結(jié)構(gòu)均有改變，提示其藥物代謝能力會受影響。
　　2．成功克隆了 CYP2C9*1（野生型基因）及 CYP2C9*16（突變體基因），獲得pET-32a-CYP2C9*1、pET-32a-CYP2C9*16兩種重組原核表達(dá)質(zhì)粒，并在BL21宿主菌種中得以