白藜蘆醇改善AD大鼠記憶的Aβ1-42轉(zhuǎn)運(yùn)及NF-κB炎性信號(hào)調(diào)節(jié)機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討不同濃度白藜蘆醇(Res)對(duì) AD大鼠學(xué)習(xí)記憶與 Aβ1-42轉(zhuǎn)運(yùn)的影響及對(duì)NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：
　　本研究分為以下三部分：
　　第一部分：白藜蘆醇改善AD大鼠記憶功能與神經(jīng)元結(jié)構(gòu)
　　將健康成年雌性Wis tar大鼠(200~220 g)60只按體重隨機(jī)分為6組，分別為 AD模型組；Res20 mg/k g、40 mg/k g、80 mg/k g干預(yù)組；戊酸雌

2、二醇組(0.8 mg/k g)；假手術(shù)對(duì)照組。采用去卵巢合并D-半乳糖(D-gal,100 mg/kg)注射制備AD大鼠模型。術(shù)后一周，傷口初步愈合后開始灌胃。AD模型組：每日腹腔注射D-ga l+蒸餾水灌胃；Res20 mg/k g、40 mg/k g、80 mg/k g干預(yù)組：每日腹腔注射D-ga l，并分別以劑量為20 mg/k g、40 mg/k g、80 mg/k g Res灌胃；戊酸雌二醇組：每日腹腔注射D–ga l+0.8

3、 mg/k g戊酸雌二醇灌胃；假手術(shù)對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水+蒸餾水灌胃，干預(yù)持續(xù)12周。大鼠空間記憶功能用Morris水迷宮方法檢測(cè)；心臟灌流后取海馬組織，戊二醛固定后透射電鏡觀察神經(jīng)元線粒體、突觸、細(xì)胞核超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　第二部分：白藜蘆醇對(duì)AD大鼠中Aβ1-42轉(zhuǎn)運(yùn)與聚集與血腦屏障完整性的影響
　　大鼠分為6組：AD模型組、Re s20、40、80mg/k g組，戊酸雌二醇組及假手術(shù)對(duì)照組，頸靜脈取血后分離大鼠海馬

4、組織，ELISA檢測(cè)大鼠血清與海馬組織中 Aβ1-42含量變化，Western blot檢測(cè)大鼠海馬組織中β-APP蛋白、RAGE蛋白、MMP-9蛋白、Claudin-5蛋白表達(dá)總量，IHC檢測(cè)RAGE蛋白、Claudin-5蛋白表達(dá)分布。
　　第三部分：白藜蘆醇通過(guò)NF-κB炎性信號(hào)通路調(diào)節(jié)AD大鼠海馬炎癥
　　大鼠分為6組：AD模型組、Res20 mg/k g、40 mg/k g、80 mg/k g組，戊酸雌二醇組及假手

5、術(shù)對(duì)照組，頸靜脈取血后分離大鼠海馬組織，Western blot檢測(cè)大鼠海馬組織中N F-κB蛋白，ELIS A檢測(cè)大鼠血清中TN F-α與IL-6濃度，并且檢測(cè)海馬組織中iNOS活力與NO濃度。
　　結(jié)果：
　　第一部分：白藜蘆醇改善AD大鼠記憶功能與神經(jīng)元結(jié)構(gòu)
　　1. Res干預(yù)組與AD模型組大鼠體重、大鼠增重、攝食量和食物利用率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2. Morris水迷宮結(jié)果中，隨著訓(xùn)

6、練天數(shù)增加，各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短，與AD模型組比較， Res80 mg/k g組、戊酸雌二醇組大鼠逃避潛伏期明顯縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增加(P<0.05)，Res各組大鼠在目標(biāo)象限內(nèi)停留時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)。
　　3.在透射電鏡下(×20000)，與AD模型組比較，Res80 mg/kg組線粒體空泡樣變面積明顯變小(P<0.05)；戊酸雌二醇組較AD模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；在電鏡下(×30000)，AD模型組

7、突觸結(jié)構(gòu)減少，且突觸間隙不清晰，突觸前后成分電子密度降低，突觸小泡減少；Res80 mg/kg劑量組突觸的數(shù)量較AD模型組增多；在電鏡下(×12000)，與假手術(shù)對(duì)照組比較，AD模型組神經(jīng)元有核變形與核碎裂，Res80 mg/kg劑量組有改善。
　　第二部分：白藜蘆醇對(duì)AD大鼠中Aβ1-42轉(zhuǎn)運(yùn)與聚集與血腦屏障完整性的影響
　　1. Res20、40、80 mg/k g組大鼠海馬β-APP蛋白表達(dá)水平較模型組明顯下降(P<0

8、.05)；海馬組織中Res80 mg/kg組Aβ1-42含量較AD模型組明顯降低(P<0.05)；且血清中Res20 mg/kg組Aβ1-42含量較AD模型組顯著升高(P<0.05)；Western blot與IHC結(jié)果中， AD模型組大鼠海馬中RAGE表達(dá)總量較假手術(shù)對(duì)照組RAGE水平升高(P<0.05)，且RAGE表達(dá)分布在大鼠海馬組織血管處的量明顯升高(P<0.05)；Res20、40、80 mg/kg組和戊酸雌二醇組大鼠海馬中R

9、AGE表達(dá)總量AD較模型組都有明顯的下降(P<0.05)，且Res80 mg/kg組及戊酸雌二醇組的海馬組織血管處的RAGE表達(dá)量AD較模型組均有顯著的下降(P<0.05)。
　　2. Western blot分析中，AD模型組大鼠海馬中MMP-9表達(dá)總量較假手術(shù)對(duì)照組升高(P<0.05)，Res20、40、80 mg/k g組和戊酸雌二醇組大鼠海馬組織中MMP-9表達(dá)量較AD模型組都有明顯的下降(P<0.05)；Claudin-

10、5的Western blot與IHC結(jié)果中，與AD模型組大鼠海馬中Claudin-5表達(dá)總量較假手術(shù)對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，且Claudin-5表達(dá)分布在大鼠海馬組織血管處的量明顯降低(P<0.05)；Res20、40、80mg/kg組和戊酸雌二醇組大鼠海馬中Claudin-5表達(dá)總量較AD較模型組都有明顯的升高(P<0.05)，且Res80 mg/k g組及戊酸雌二醇組的海馬組織血管處的C la ud in-5表達(dá)量AD較模型

11、組均有顯著的下降(P<0.05)。
　　第三部分：白藜蘆醇通過(guò)NF-κB炎性信號(hào)通路調(diào)節(jié)AD大鼠海馬炎癥
　　1. Western blot實(shí)驗(yàn)中，AD模型組大鼠海馬組織中NF-κBp65相對(duì)水平為較假手術(shù)對(duì)照組升高(P<0.05)， Res40、80 mg/k g組和戊酸雌二醇組大鼠海馬組織中NF-κBp65相對(duì)含量較AD模型組都有明顯的下降(P<0.05)。
　　2.在大鼠血清中，AD模型組TNF-α濃度和IL-6

12、濃度均較假手術(shù)對(duì)照組顯著升高(P<0.05)，Res20、40、80 mg/kg劑量組和戊酸雌二醇組TNF-α濃度和IL-6濃度均較AD模型組明顯降低(P<0.05)。
　　3.在大鼠海馬組織中，Res20、40、80 mg/kg劑量組和假手術(shù)對(duì)照組iNOS活力和NO濃度較AD模型組明顯降低(P<0.05)，戊酸雌二醇組iNOS活力和NO濃度較AD模型組亦明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. Res在一定劑