柴黃清胰活血顆粒對重癥急性胰腺炎模型大鼠腸粘膜屏障的影響.pdf

1、目的：
　　探討“柴黃清胰活血顆?！睂χ匕Y急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)模型大鼠腸粘膜屏障的影響及作用機制。
　　方法：
　　選用雄性健康SD大鼠120只，采用完全隨機法分為5組：假手術(shù)組、SAP模型組、柴黃清胰活血顆粒低濃度組、柴黃清胰活血顆粒中濃度組、柴黃清胰活血顆粒高濃度組，每組各24只。通過向胰膽管內(nèi)逆行注射3.5％?；悄懰醽碚T導(dǎo)SAP模型。待造模成功的大鼠麻醉蘇醒后立

2、即進(jìn)行灌胃，每4小時1次，按1ml/100g體重給藥，高、中、低濃度組分別予高、中、低濃度柴黃清胰活血顆粒溶液灌胃（中濃度為0.1g/ml，高、中、低濃度比分別為4:2:1），模型組、假手術(shù)組予以等量生理鹽水灌胃。造模第6h、12h、24h每組各取8只大鼠麻醉后開腹，觀察胰腺出血壞死、腸積氣情況；取腹主動脈血制備血清，分別檢測血淀粉酶、二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）、D-乳酸、內(nèi)毒素；取胰腺、十二指腸組織予以HE染

3、色后在光鏡下觀察；并運用免疫組化法檢測小腸黏膜緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、建立模型：大鼠造模6h后可見胰腺組織出現(xiàn)片狀出血和紫黑色壞死；HE染色光鏡下可見胰腺間質(zhì)水腫、點片狀出血、炎細(xì)胞浸潤、灶性變性壞死；血淀粉酶有不同程度升高。上述觀察結(jié)果均符合SAP改變，提示造模成功。
　　2、肉眼觀察：SAP模型組大鼠胰腺組織出現(xiàn)片狀出血和紫黑色壞死；胃腸道積氣明顯，腸管管壁變薄，透亮；大網(wǎng)膜、腸系

4、膜上有較多皂化斑。而高、中、低濃度組大鼠胰腺壞死及腸道積氣較模型組減輕，大網(wǎng)膜、腸系膜上有較少皂化斑。
　　3、血淀粉酶：與假手術(shù)組比較，模型組及高、中、低濃度組的血淀粉酶在第6、12、24小時均升高（P<0.05）。高、中、低濃度組第12、24小時血淀粉酶較模型組均降低（P<0.05）；第12小時中、低濃度組的血淀粉酶比高濃度組高（P<0.05）。第24小時血淀粉酶高濃度組>低濃度組>中濃度組（P值均<0.05）。
　　4

5、、通過對大鼠血清DAO、D-乳酸、內(nèi)毒素檢測，模型組及高、中、低濃度組的D-乳酸、DAO、內(nèi)毒素均較假手術(shù)組升高（P<0.05），說明SAP造模成功后，血清D-乳酸、DAO、內(nèi)毒素增加。第12小時高、中、低濃度組的內(nèi)毒素組間比較均有差異（P<0.05），第12小時的D-乳酸低濃度組分別與高、中濃度組比較有差異（P<0.05），第12小時低濃度組的DAO比模型組高（P<0.05），第24小時中濃度組的DAO比模型組高（P<0.05），除第

6、24小時低濃度組的DAO比高濃度、中濃度組低（P<0.05）外，其它濃度組組間未見明顯差異。提示：柴黃清胰活血顆?？蓽p少SAP大鼠血 D-乳酸、血漿內(nèi)毒素的產(chǎn)生，降幅由大到小依次為高濃度組、中濃度組、低濃度組。本次實驗未觀察到該制劑對SAP大鼠血DAO明顯的量效、時效關(guān)系。
　　5、胰腺組織HE染色光鏡下顯示：模型組胰腺組織受損嚴(yán)重，且隨著時間遞增逐漸加重，第6h即可見胰腺間質(zhì)水腫、點片狀出血，炎細(xì)胞浸潤，灶性變性、壞死。高、中、

7、低濃度組第6h與模型組比較未見明顯改變，而第12h、24h與模型組比較損傷有所減輕。高、中、低濃度組同時間點對比，胰腺組織損傷好轉(zhuǎn)幅度由大到小依次為高濃度組、中濃度組、低濃度組。胰腺病理學(xué)評分：第24小時高、中、低濃度組病理學(xué)評分較模型組有顯著變化，且呈降低趨勢（P<0.05）；第24小時高、中、低濃度組的病理學(xué)評分組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。提示：柴黃清胰活血顆?？山档?SAP大鼠胰腺病理學(xué)評分，降幅由大到小依次為高濃度組

8、、中濃度組、低濃度組。
　　6、大鼠十二指腸HE染色光鏡下顯示：模型組腸粘膜受損嚴(yán)重，且隨著時間遞增逐漸加重，第6h即可見腸絨毛充血水腫，大量中性粒細(xì)胞浸潤、杯狀細(xì)胞減少，頂端上皮壞死、脫落，潰瘍形成。第12h、24h高、中、低濃度組與模型組比較損傷均有所減輕。高、中、低濃度組同時間點對比，腸粘膜損傷好轉(zhuǎn)幅度由大到小依次為高、中濃度組>低濃度組。提示柴黃清胰活血顆?？蓽p少SAP大鼠腸粘膜損傷程度，且腸粘膜損傷改善程度為高、中濃度組

9、>低濃度組。
　　7、大鼠十二指腸腸粘膜緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)顯示：模型組及高、中、低濃度組的細(xì)胞漿、細(xì)胞膜表達(dá)水平均較假手術(shù)組顯著下降，提示SAP大鼠造模成功后，腸黏膜組織中Occludin的表達(dá)減弱。而高、中、低濃度組與同時間點的模型組比較，Occludin的表達(dá)逐漸恢復(fù)，且隨著時間遞增表達(dá)逐漸增強。提示柴黃清胰活血顆?？苫謴?fù)SAP大鼠緊密連接蛋白Occludin表達(dá)，且恢復(fù)程度為高、中濃度組>低濃度組。