富納米硒沼澤紅假單胞菌對四氯化碳導(dǎo)致肝損傷小鼠的保護作用研究.pdf

1、本文采用單因子實驗和四因素三水平正交實驗，確定了沼澤紅假單胞菌（Rhodopseudomonas palustris）還原亞硒酸鈉為紅色單質(zhì)硒的最優(yōu)條件。在優(yōu)化實驗中，先確定了沼澤紅假單胞菌還原亞硒酸鈉四個因素（亞硒酸鈉濃度、菌種接種量、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)時間）的最佳水平，再選取四因素三水平：亞硒酸鈉濃度（1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L）、菌種接種量（5％、10%、15%）、培養(yǎng)基初始pH值（5、6、7）、培養(yǎng)時間（

2、6d、7d、8d）進行正交實驗，確定了轉(zhuǎn)化的最佳水平。在此基礎(chǔ)上，為進一步研究本實驗室轉(zhuǎn)化得到的紅色單質(zhì)硒的生物活性，將雄性昆明小鼠隨機分為9個組，即空白對照組、富納米硒沼澤紅假單胞菌高劑量對照組（200μg/kg.BW）、三個濃度的富納米硒沼澤紅假單胞菌處理組（50、100、200μg/kg.BW+CCl4）以及三個相應(yīng)劑量沼澤紅假單胞菌處理組，研究富納米硒沼澤紅假單胞菌對小鼠CCl4致急性肝損傷的肝保護效應(yīng)。小鼠按相應(yīng)劑量的溶液連續(xù)

3、灌胃14d之后，除空白對照組和富納米硒沼澤紅假單胞菌高劑量對照組腹腔注射植物油之外，其余組均一次性腹腔注射1%的CCl4（10mL/Kg.BW），建立急性肝損傷模型。造模24h后取血清，測各項血清酶指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（AKP）、乳酸脫氫酶（LDH）；取肝臟和脾臟分別計算肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)；取肝組織檢測肝臟抗氧化酶（SOD、CAT、GPX）活力以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物（MDA）水平；采用常規(guī)石蠟切片法研

4、究了富納米硒沼澤紅假單胞菌對小鼠肝組織病理結(jié)構(gòu)與功能的影響。旨在驗證富納米硒沼澤紅假單胞菌對小鼠肝臟的保護作用。結(jié)果顯示：
　　1.通過沼澤紅假單胞菌將亞硒酸鈉還原為紅色單質(zhì)硒條件的優(yōu)化：對轉(zhuǎn)化率影響較大的因素由高到低依次為：亞硒酸鈉濃度>培養(yǎng)時間>培養(yǎng)基初始pH值>菌種接種量；N菌株還原亞硒酸鹽得到紅色單質(zhì)硒的最適條件為：亞硒酸鈉添加量2.0mmol/L、培養(yǎng)時間8d、培養(yǎng)基初始pH7.0和接種量15%，優(yōu)化后轉(zhuǎn)化率達到91.3

5、6%。
　　2.小鼠體內(nèi)生理生化實驗結(jié)果：富納米硒沼澤紅假單胞菌最高劑量對照組與空白對照組基本保持在同一水平，四氯化碳模型組均與空白對照組差異極顯著。富納米硒沼澤紅假單胞菌能夠明顯降低由CCl4誘導(dǎo)的肝損傷引起的小鼠血清中ALT、AST、AKP、LDH升高；降低肝損傷導(dǎo)致的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)增加；提高肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）活力，降低肝組織內(nèi)丙二醛（MDA）含量，且硒劑量

6、越高，保護效果越明顯。
　　3.小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示：富納米硒沼澤紅假單胞菌能夠減輕四氯化碳損傷導(dǎo)致的肝臟表面出血點癥狀；能夠明顯改善肝損傷小鼠的肝細(xì)胞壞死、炎性浸潤、氣球樣變、細(xì)胞水腫、核固縮現(xiàn)象，保護效果呈明顯劑量效應(yīng)，最高劑量保護組僅有散在點狀壞死，輕微細(xì)胞水腫。
　　由以上研究結(jié)果得出如下結(jié)論：
　　?富納米硒沼澤紅假單胞菌在一定程度上可以減少肝損傷所致血清酶的釋放，提高抗氧化酶活力。
　　?能