胃癌患者外周血及腫瘤組織中Treg細(xì)胞及亞群的研究.pdf

1、目的：胃癌（Gastric cancer, GC）是世界上腫瘤相關(guān)性死亡的主要原因之一，而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg cells）被認(rèn)為是抑制抗腫瘤免疫促進(jìn)腫瘤免疫耐受的主要因素之一。以往有關(guān)Treg細(xì)胞與胃癌的研究結(jié)果存在爭(zhēng)議，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞是一類具有異質(zhì)性的T細(xì)胞亞群,存在表型和功能的不同，這可能是導(dǎo)致之前結(jié)果不一致的原因。而目前鮮有關(guān)于這類Treg亞群細(xì)胞與胃癌的研究報(bào)道，因此本次研究通過(guò)檢測(cè)胃癌患者外周血以及腫瘤組織中Treg

2、細(xì)胞及亞群的表達(dá)，探索Treg細(xì)胞及亞群與胃癌患者各臨床參數(shù)的相關(guān)性。
　　方法：搜集胃癌患者和健康對(duì)照組外周血、同一患者的胃癌組織和癌旁正常組織，制備、分離、提純單個(gè)核細(xì)胞，標(biāo)記表面抗體CD3、CD4、CD45RA、CD25和核內(nèi)抗體Foxp3。再根據(jù)CD45RA和Foxp3的表達(dá)將Treg細(xì)胞分為CD45RA+Foxp3lo（rTreg），CD45RA-Foxp3hi（aTreg）和 CD45RA-Foxp3lo（non-Tr

3、eg）三種亞群。流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析各個(gè)組Treg及亞群細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例。Graph Pad Prism統(tǒng)計(jì)軟件（5.0版本）統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，Kruskal-wallis檢驗(yàn)（多組）、Mann-Whitney U檢驗(yàn)（兩組）比較各組間的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：胃癌患者外周血（GC-PBMC）及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）中總的CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例要比健康對(duì)照組（HD-PBMC

4、）和癌旁正常組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（NIL）的明顯增加（P＜0.0001，P＜0.0001），其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在外周血中胃癌患者的aTreg和non-Treg細(xì)胞比例較健康對(duì)照組明顯增加（P＜0.0001,P＜0.0001），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中，TIL-aTreg和TIL-non-Treg細(xì)胞比例較NIL明顯增加（P＜0.0001,P＜0.001）。分析 Treg細(xì)胞及其亞群與各臨床病理參數(shù)關(guān)系發(fā)現(xiàn)，僅發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移（淋

5、巴轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移）與Treg及亞群細(xì)胞相關(guān)，而與腫瘤位置、大小、分化程度、分期以及血清CEA濃度無(wú)明顯相關(guān)性。出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者無(wú)論在PBMC還是TIL中總的CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞所占比例均較無(wú)轉(zhuǎn)移者明顯增加（P＜0.05，P＜0.01），亞群細(xì)胞中只有轉(zhuǎn)移患者 TIL中的aTreg細(xì)胞所占比例較無(wú)轉(zhuǎn)移者明顯增加（P＜0.01）。
　　結(jié)論：我們的研究證實(shí)了在胃癌患者外周血和TIL中Treg細(xì)胞所占比例明顯增加，以aT

6、reg細(xì)胞增加最為明顯。而且只有TIL中增加的aTreg細(xì)胞與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示在腫瘤微環(huán)境中起主要抑制抗腫瘤免疫的是TIL中的aTreg細(xì)胞，促使疾病的進(jìn)展。所以在今后的免疫靶向治療中，局部地選擇性消除這類亞群細(xì)胞而非消除其他亞群細(xì)胞和（或）全身性的消除整個(gè)Treg細(xì)胞將有望成為一項(xiàng)有效治療胃癌的手段。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血及TIL中的non-Treg細(xì)胞也是增加的，但與疾病無(wú)明顯關(guān)聯(lián)，所以在以后的研究中，我們需要鑒別不同的Tr