Proliferin對(duì)小鼠C2C12細(xì)胞和衛(wèi)星細(xì)胞的增殖調(diào)控作用機(jī)制研究.pdf

1、骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育與再生修復(fù)機(jī)制一直是動(dòng)物遺傳育種和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一，解析其分子機(jī)理，對(duì)研究肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律具有非常重要的意義。Proliferin(PLF)屬于催乳素/生長(zhǎng)激素超家族，能夠調(diào)控血管生成，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和毛囊角質(zhì)細(xì)胞的遷移，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖具有正調(diào)控作用，然而其對(duì)肌源細(xì)胞的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　本研究以小鼠成肌細(xì)胞C2C12和小鼠衛(wèi)星細(xì)胞為對(duì)象，研究PLF的表達(dá)模式及其調(diào)控規(guī)律，以期能夠初步闡述PLF對(duì)成肌細(xì)胞增

2、殖和分化調(diào)控的機(jī)理，為深入研究骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律奠定基礎(chǔ)。論文的主要結(jié)果如下:
　　(1)鑒定了PLF在C2C12細(xì)胞中的時(shí)空表達(dá)規(guī)律，并確證了家族中的一個(gè)基因Prl2c2起主導(dǎo)作用。通過(guò)RT-PCR和Q-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，結(jié)果表明PLF在C2C12細(xì)胞增殖期的表達(dá)量極顯著高于分化期(p＜0.01);酶切分型和單克隆測(cè)序的結(jié)果表明，PLF家族中的一個(gè)基因Prl2c2起主導(dǎo)作用。
　　(2)在成肌細(xì)胞C2C12中鑒定了PLF促進(jìn)

3、增殖抑制分化的生物學(xué)特征。si-PLF轉(zhuǎn)染細(xì)胞，流式分析細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在G0/G1期的比例極顯著增加(p＜0.01)，S期極顯著下降(p＜0.01);xCELLigence監(jiān)測(cè)系統(tǒng)分析表明，轉(zhuǎn)染si-PLF后，細(xì)胞的生長(zhǎng)速度下降;si-PLF轉(zhuǎn)染細(xì)胞，EdU染色后流式分析表明，EdU陽(yáng)性率極顯著降低(p＜0.01)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染si-PLF后誘導(dǎo)分化，Q-PCR檢測(cè)表明肌肉分化標(biāo)記基因MyoG的表達(dá)量顯著上調(diào)(p＜0.05)。
　

4、　(3)在C2C12細(xì)胞中，PLF通過(guò)調(diào)控MAPK和Wnt信號(hào)通路中相關(guān)基因的表達(dá)量，從而發(fā)揮促增殖的作用。
　　(4)通過(guò)siRNA和Q-PCR迸一步確證了與PLF相互作用的基因網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)Q-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，C2C12細(xì)胞轉(zhuǎn)染si-PLF后，Xirp1，Rrm2b，Ywhaz和Pole4 mRNA的表達(dá)量極顯著下降(p＜0.01)，Ttn mRNA的表達(dá)量顯著下降(p＜0.05)。
　　(5)鑒定了PLF對(duì)小鼠衛(wèi)星細(xì)胞的時(shí)