G-四鏈體-heminDNA酶的應(yīng)用研究.pdf

1、G-四鏈體-氯化血紅素(hemin)DNA酶(簡稱G-四鏈體DNA酶)是一種由氯化血紅素和特定的核酸G-四鏈體形成的具有過氧化物酶活性的人工模擬酶。G-四鏈體-hemin DNA酶可以有效的催化H2O2氧化ABTS(2，2'-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸))的反應(yīng)，生成有特征吸收的綠色產(chǎn)物ABTS·+自由基。自從G-四鏈體DNA酶第一次被報道以來，這類酶已經(jīng)被廣泛用于生物和化學(xué)傳感器的設(shè)計。本文利用該酶的特點(diǎn)，設(shè)計出了一種簡

2、單靈敏的檢測汞離子和半胱氨酸的方法；另外也拓展了該酶的應(yīng)用范圍，將其用于抗氧化劑抗氧化性能的研究。
　　 Hg2+可以和兩個胸腺嘧啶堿基T結(jié)合，生成T-Hg2+-T堿基對，從而對DNA雙鏈中的T-T堿基錯配起到穩(wěn)定作用?；谶@種作用，我們設(shè)計了一種簡單方便的檢測HG2+的方法。該方法中只使用了一條寡核苷酸鏈，這條寡核苷酸鏈主要有兩個片段組成：一段是5'端的富G序列，另一段是3'端的探針序列。沒有Hg2+存在下，單寡核苷酸鏈形成一

3、種莖-環(huán)結(jié)構(gòu)。富G序列的一部分被包埋在莖的分子內(nèi)二倍體結(jié)構(gòu)中，不能形成G-四鏈體結(jié)構(gòu)，因而不顯示酶活性。然而，當(dāng)加入Hg2+時，該寡核苷酸鏈形成另外一種莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，其中的T-T錯配可以被Hg2+穩(wěn)定，形成T-Hg2+-T堿基對。這種結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變將富G序列從莖的二倍體結(jié)構(gòu)中完全釋放出來，折疊成分子內(nèi)G-四鏈體，在hemin存在時形成G-四鏈體DNA酶，該酶可以有效地催化ABTS和H2O2的反應(yīng)，產(chǎn)生綠色的ABTS·+自由基，導(dǎo)致體系在420

4、 nm處的吸光度值增加。這種方法具有很高的靈敏度和選擇性，檢測限可達(dá)9.2 nM。同時利用汞離子和含硫氨基酸-半胱氨酸(Cys)之間的強(qiáng)相互作用，此方法可進(jìn)一步用來檢測Cys。
　　 另外，我們報道了一種將ATP穩(wěn)定G-四鏈體DNA酶催化的ABTS-H2O2反應(yīng)體系用于抗氧化性能研究的簡單方法。該方法采取的是一種“后加入”模式。ABTS·+自由基是通過使用一種既經(jīng)濟(jì)又穩(wěn)定的人工酶(G-四鏈體DNA酶)催化ABTS-H2O2反應(yīng)體