四株不同生境來(lái)源微生物胞外多糖的研究.pdf

1、微生物資源的利用受到人們的廣泛關(guān)注，而生存于海洋、鹽堿地等特殊環(huán)境的微生物，其代謝過(guò)程受到環(huán)境的影響使其所產(chǎn)生的胞外多糖具有獨(dú)特結(jié)構(gòu)和各種活性。本文從海洋和鹽堿地等環(huán)境來(lái)源的四株微生物的發(fā)酵液中提取胞外多糖，運(yùn)用各種色譜分離技術(shù)得到純品多糖，采用化學(xué)方法和現(xiàn)代波譜分析技術(shù)對(duì)多糖進(jìn)行理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)研究，并對(duì)多糖的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定。研究結(jié)果如下:
　　從紅樹(shù)林泥樣來(lái)源放線菌THS-55發(fā)酵液中提取胞外多糖粗品TW，經(jīng)Q-Sephar

2、ose Fast Flow陰離子交換柱層析分離得到兩種多糖TWB和TWA，TWB經(jīng)Sephacryl S-100凝膠柱層析純化得到多糖TWB-A。經(jīng)高效凝膠滲透色譜和PMP柱前衍生高效液相色譜分析表明，TWB-A分子量為30.8 kDa，TWB-A主要由葡萄糖組成，含有微量甘露糖，其摩爾比為13.67∶1。經(jīng)紅外光譜、甲基化和核磁共振波譜分析表明，TWB-A的主鏈部分主要由→3）Glcp（1→組成，在其C-4位存在一定分支結(jié)構(gòu)，分支由G

3、lcp(1→組成，通過(guò)體外超氧陰離子自由基、DPPH自由基和羥基自由基清除能力的評(píng)價(jià)表明，TWB-A對(duì)DPPH自由基的清除活性較高，也有一定超氧陰離子自由基和羥基自由基清除能力，其清除超氧陰離子自由基、DPPH自由基和羥基自由基的EC50值分別為4.89 mg/mL、1.79mg/mL和6.21 mg/mL。TWB-A為結(jié)構(gòu)新穎具有抗氧化活性的微生物胞外多糖，表明海洋放線菌是結(jié)構(gòu)新穎的活性胞外多糖的重要來(lái)源。
　　從濱州鹽堿地來(lái)源

4、的植物內(nèi)生真菌SXH-69發(fā)酵液中提取多糖粗品HS，經(jīng)Q-Sepharose Fast Flow陰離子交換柱層析和Sephacryl S-100凝膠柱層析分離純化得到兩種多糖組分HSA-M和HSC-N。高效凝膠滲透色譜分析表明，HSA-M和HSC-N的分子量分別為13.5 kDa和18.3 kDa。PMP柱前衍生高效液相色譜分析表明，HSA-M主要含有甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖和半乳糖，其摩爾比為2.21∶0.20∶0.68∶1.00;

5、 HSC-N主要含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖且摩爾比為5.06∶0.31∶1.00。經(jīng)紅外光譜和甲基化分析表明，HSA-M中主要含有→4)Man(1→、→2)Gal(1→、→6)Glc(1→和→6)Man(1→連接方式，還含有少量的Glc（1→、Man(1→和→2，4)Man(1→連接片段;而HSC-N中主要含有→4)Man(1→、→6)Man(1→和→2，4)Man(1→連接方式，也含有少量的Man(1→和→2)Glc(1→。體外抗氧化

6、活性研究表明，HSA-M對(duì)DPPH自由基和羥基自由基清除活性較高，也有一定的超氧陰離子自由基清除能力，其清除超氧陰離子自由基、DPPH自由基和羥基自由基的EC50值分別為8.17 mg/mL、1.87 mg/mL和2.98 mg/mL。
　　從膠州灣海藻共附生真菌2S-2發(fā)酵液中提取多糖粗品ZD，經(jīng)Q-SepharoseFast Flow陰離子交換柱層析和Sephacryl S-100凝膠柱層析分離純化得到兩種多糖組分ZDA-M和

7、ZDB-N。高效凝膠滲透色譜分析表明，ZDA-M和ZDB-N分子量分別為3.65 kDa和3.75 kDa。PMP柱前衍生高效液相色譜分析表明，ZDA-M和ZDB-N中主要含有甘露糖和葡萄糖且摩爾比分別為1∶21.9和1∶28.3。紅外光譜和甲基化分析表明，ZDA-M以→4）Glc(1→、末端Glc、→6)Glc(1→和→2，4)Glc(1→連接方式為主。體外抗氧化活性分析表明，ZDA-M具有DPPH自由基和羥基自由基清除活性，其清除D

8、PPH自由基和羥基自由基的EC50值分別為2.89 mg/mL和7.54 mg/mL。
　　從西沙海綿來(lái)源真菌Paraphaeosphaeriasp ZXM-5發(fā)酵液中提取多糖粗品ZY，經(jīng)Q-Sepharose Fast Flow陰離子交換柱層析和Sephacryl S-100凝膠柱層析分離純化得到多糖組分ZYB-A，得率為0.37g/L。經(jīng)高效凝膠滲透色譜分析表明，ZYB-A的分子量為16.3 kDa。PMP柱前衍生高效液相色譜

9、分析表明，ZYB-A主要含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖且摩爾比為7.71∶0.76∶1.78。紅外光譜和甲基化分析表明，ZYB-A糖鏈中以末端Man、→3）Gal（1→和→3）Man（1→連接方式為主，還有少量的→4）Man(1→和→6)Glc(1→，另外存在少量的→3，4)Man(1→和→4，6)Man(1→，說(shuō)明ZYB-A是一個(gè)多分支的葡萄半乳甘露聚糖。
　　本論文為“海洋糖庫(kù)”的建設(shè)提供了結(jié)構(gòu)新穎的海洋多糖，為海洋微生物胞外多糖