兩株滸苔來源微生物的次生代謝產物研究.pdf

1、海洋來源的微生物已經越來越成為天然產物研究的重點對象，從中發(fā)現的新天然產物數量巨大，每年呈遞增的趨勢快速發(fā)展。海洋來源的內生微生物更是具有其研究的特殊價值，因其與宿主進行營養(yǎng)爭奪而可能產生一些生物活性優(yōu)秀的化合物，這為新藥研發(fā)提供了一個很好的方向。為了尋找當前急需的藥物研發(fā)先導化合物，本文通過采集青島滸苔以及其他樣品作為內生微生物的來源材料，進行分離篩選，然后通過化學和生物活性兩方面的綜合考察，開展了滸苔來源內生微生物的次級代謝產物研究

2、工作。主要內容包括:滸苔內生真菌及放線菌的分離培養(yǎng)，微生物的發(fā)酵及初步篩選，talent strain的發(fā)現以及進一步優(yōu)化發(fā)酵，化合物的分離純化，單體化合物的結構全面解析鑒定，單體化合物的生物活性評價。
　　從青島的四大海水浴場（第一海水浴場，第二海水浴場，棧橋海水浴場，石老人海水浴場）采集新鮮滸苔樣品，以及其他海洋來源的樣品，通過梯度稀釋法以及蔗糖密度梯度法分離得到200株微生物。采用pNPG模型進行了α-糖苷酶的活性篩選。而后

3、通過TLC，HPLC進行化學方面的考察，最終確定了兩株滸苔來源的微生物作為進一步系統(tǒng)研究的“talent strain”—放線菌OUCMDZ3434和真菌OUCMDZ3416。放線菌OUCMDZ3434通過16sRNA進行鑒定為鏈霉菌Streptomyces sp.。真菌OUCMDZ3416尚未鑒定。
　　通過不同發(fā)酵影響條件（發(fā)酵時間，酸堿度，天數，鹽度等）的考察，全面分析了不同條件下菌株次級代謝產物的變化，最終選定了在已考察的

4、條件中表現最好的方法進行進一步放大發(fā)酵，并對發(fā)酵液進行了乙酸乙酯的萃取得到粗浸膏。而后通過不同的色譜技術（硅膠柱色譜，凝膠色譜，大孔樹脂以及高效液相色譜等）對發(fā)酵產物進行了系統(tǒng)的分離純化，從放線菌OUCMDZ3434中得到了12個單體化合物(1-12)，從真菌OUCMDZ3416中得到了6個單體化合物(13-18)。然后通過理化性質以及現代波普技術進行了單體化合物的結構解析鑒定，其中有10個新化合物。所得化合物均為聚酮途徑來源。

5、　　對放線菌OUCMDZ3434所得化合物進行了糖苷酶活性的測試結果顯示化合物1-6均比陽性對照藥阿卡波糖的活性好，其中化合物1和2表現了非常優(yōu)秀的活性，IC50分別為19.7和8.31μM，而阿卡波糖則為1.12 mM。
　　綜上所述，本文對海洋來源的內生微生物進行了篩選研究，得到了一批活性優(yōu)秀的菌株，并且對其中的兩株滸苔來源的內生微生物進行了系統(tǒng)的次級代謝產物研究，共有18個化合物被分離鑒定，包括10個新化合物，其中有2個為新