N+注入誘變選育井岡霉素A高產(chǎn)菌及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、井岡霉素是由吸水鏈霉菌井岡變種(Streptomyceshygroscopicusvar.jinggangsisyen)發(fā)酵產(chǎn)生的氨基糖苷類農(nóng)用抗生素，對水稻紋枯病有顯著的防治效果。雖然從井岡霉素發(fā)現(xiàn)迄今已有數(shù)十年，但由于其高效、低毒，對環(huán)境安全，并且尚未發(fā)現(xiàn)抗藥性，該產(chǎn)品仍擁有穩(wěn)定的市場。本文利用低能氮離子注入技術(shù)對吸水鏈霉菌井岡變種進(jìn)行了誘變處理，得到一株遺傳穩(wěn)定的高產(chǎn)菌株，并對所得高產(chǎn)菌株進(jìn)行了發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化。
　　 首

2、先對原始菌株SHJ001進(jìn)行氮離子注入誘變條件的探索，結(jié)果顯示，在氮離子束注入能量為10keV條件下，劑量為80×2.6×1013ion/cm2時(shí)，正突變率最高，達(dá)到71.4％，且正變幅較大，最高可達(dá)30.3％。選擇該劑量為最佳誘變劑量，進(jìn)行高產(chǎn)菌株的篩選工作。通過對多次誘變結(jié)果統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，氮離子注入誘變對吸水鏈霉菌井岡變種致死率和正突變率都比較高。通過多次誘變和檢測，最終篩選到一株遺傳穩(wěn)定的高產(chǎn)菌株SHJ381，其井岡霉素A含量比原始菌

3、株提高了約13％，達(dá)到25.4g/L。
　　 經(jīng)過誘變，高產(chǎn)菌株的特性發(fā)生變化，故對其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)和L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，得到高產(chǎn)菌株的最適培養(yǎng)基為：大米粉8％，淀粉0.7％，黃豆粉1％，酵母粉1％，KH2PO40.12％，NaCl0.15％，CaCO30.2％，玉米粉1.4％。相同條件下，最優(yōu)培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)生井岡霉素A含量比原始培養(yǎng)基提高了約38％，達(dá)到約34