球孢白僵菌不同菌株分生孢子耐熱力及相關(guān)孢壁蛋白分析.pdf

1、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)制劑已被廣泛的應(yīng)用于農(nóng)林害蟲生物防治。環(huán)境溫度是影響生防真菌孢子制劑貯存和應(yīng)用的關(guān)鍵因素之一。為了篩選獲得適應(yīng)我國(guó)南方夏季高溫的生防潛力菌株，并進(jìn)一步研究抗逆性生物學(xué)的分子機(jī)制，本研究對(duì)不同地理和寄主來(lái)源的12株球孢白僵菌分生孢子耐熱性定量評(píng)價(jià)，并對(duì)一種孢壁類疏水蛋白CWP15進(jìn)行了基因的全序列測(cè)定。主要內(nèi)容和結(jié)果分述如下： 孢子耐熱生物學(xué)測(cè)定研究以48℃為脅迫溫度的分生孢子耐熱

2、力測(cè)定方法和定量評(píng)價(jià)體系中引入了一個(gè)全新的變量—?dú)埓嬷笖?shù)I<,s>，即孢子在48℃脅迫下不同時(shí)刻的殘存活孢率與未經(jīng)脅迫的孢子萌發(fā)率的比值。對(duì)于原產(chǎn)地和寄主不同的12株球孢白僵菌的分生孢子進(jìn)行48℃下熱脅迫，其殘存指數(shù)隨脅迫時(shí)間的衰變過(guò)程很好地?cái)M合邏輯斯蒂模型(r<'2>≥0．97，P<0．01)。殘存指數(shù)隨時(shí)間衰變過(guò)程明顯表現(xiàn)為緩慢下降，快速下降和平緩下降三個(gè)部分。對(duì)所有供試菌株而言，孢子殘存指數(shù)均隨著48℃熱脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，且存

3、活率的衰變速度因菌株不同而異。12株球孢白僵菌對(duì)48℃熱脅迫的LT<,50>平均為12．6 min(6．7～21-2 min，)，其中有四株菌的LT<,50>低于10 min，而多數(shù)菌株的LT<,50>介于10～20 min。 FAE蛋白分析推測(cè)分生孢子孢壁類疏水蛋白即可甲酸抽提的(formic-acid-extractable，縮寫FAE)蛋白與孢子耐熱性生物學(xué)性狀有關(guān)。本研究采用Tris-Tricine緩沖體系的SDS-PA

4、GE凝膠電泳分析，對(duì)12株球孢白僵菌孢壁類疏水蛋白進(jìn)行了電泳條帶分析。結(jié)果顯示，同一菌種內(nèi)FAE蛋白組分無(wú)明顯變化，但各菌株間FAE蛋白條帶略有不同，其中15．0和17．5kDa蛋白屬于組成型表達(dá)，而12．0kDa條帶在某些菌株中未見(jiàn)。 孢壁類疏水蛋白CWP15基因序列測(cè)定與分析孢壁類疏水蛋白CWP15是本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)并推測(cè)與孢子耐熱性狀有關(guān)的一個(gè)全新的蛋白。本研究選擇12株球孢白僵菌的孢壁類疏水蛋白CWP15作為研究對(duì)象，對(duì)其基

5、因序列進(jìn)行測(cè)定及比對(duì)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其氨基酸序列含有高度保守的序列HNDRVVGAWDODVKIV，同時(shí)存在多樣性，可分為CWP15a和CWP15b兩類。其中，來(lái)自云南的三個(gè)菌株Bb0101、Bb0103和Bb0104分屬于不同的兩類，說(shuō)明同一地理來(lái)源的菌株間也存在多樣性。這意味著CWP15基因有可能作為球孢白僵菌系統(tǒng)進(jìn)化研究的新的分子標(biāo)記。 綜上所述，本研究結(jié)果表明，球孢白僵菌分生孢子耐熱力的種類變異較大，且存活率的衰變速度因