漢坦病毒分子流行病學(xué)研究及l(fā)p.ompm基因的克隆表達(dá)

1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文漢坦病毒分子流行病學(xué)研究及LP.ompM基因的克隆表達(dá)姓名：蘆殿香申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳建平20050501四川大學(xué)碩士學(xué)位論文 漢坦病毒分子流行病學(xué)研究及L P ．o m p M 基因的克隆表達(dá)嗜肺軍團(tuán)菌是一種革蘭染色陰性，選擇} 生胞內(nèi)寄生的細(xì)菌。人類感染嗜肺軍團(tuán)菌可引起肺部疾病，以P o n t i a c 熱和非典型肺炎癥狀為主。軍團(tuán)菌可在多種細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，但在人類以寄生于肺泡巨噬細(xì)胞為

2、主。已有關(guān)于軍團(tuán)菌外膜蛋白成分是否作為細(xì)菌胞內(nèi)寄生及致病的關(guān)鍵性因素的研究，并且已發(fā)現(xiàn)了部分對(duì)軍團(tuán)菌胞內(nèi)寄生：逃避宿主抗原遞呈途徑及殺滅宿主細(xì)胞起重要作用的軍團(tuán)菌的基因2 州。雖然關(guān)于嗜肺軍團(tuán)菌及其它軍團(tuán)菌屬的外膜蛋白是否存在共性的報(bào)道觀點(diǎn)不一，但一些血清型別的嗜肺軍團(tuán)菌確實(shí)含有分子量在2 5 k D a - 2 9k D a 的外膜蛋白成份。據(jù)K r i o n s 報(bào)道，把編碼嗜肺軍團(tuán)菌2 5 k D a 主要外膜蛋白的基因轉(zhuǎn)入大腸

3、桿菌J M 8 3 ，表達(dá)的蛋白可使非調(diào)理素依賴的對(duì)U ．9 3 7 細(xì)胞的粘附作用較對(duì)比組增加5 倍以上，應(yīng)用主要外膜蛋白特異的單克隆抗體可阻斷此粘附作用，故認(rèn)為軍團(tuán)菌2 5 K D a 的主要外膜蛋白( M O M P ) 作為一種粘附因子可介導(dǎo)軍團(tuán)菌粘附到宿主細(xì)胞，與軍團(tuán)菌的毒力緊密相關(guān)。因此，我們選擇編碼主要外膜蛋白的基因作為研究對(duì)象，希望能為研究主要外膜蛋白基因的結(jié)構(gòu)，功能及研制軍團(tuán)菌基因工程疫苗奠定理論基礎(chǔ)。本研究分為兩部分

4、進(jìn)行第一部分：以5 8 8 份捕獲于吉林省不同地區(qū)的褐家鼠鼠肺材料作為研究對(duì)象，利用贏接免疫熒光法篩選其中的陽性鼠肺，分析吉林省褐家鼠的漢坦病毒帶毒率；并用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)( R T —M R ) 擴(kuò)增8 份吉林省褐家鼠中具有地域代表性的陽性鼠肺漢坦病毒的M 和s 基因片段，將其與我國(guó)及其他國(guó)家具有代表性毒株相應(yīng)的基因片段進(jìn)行序列對(duì)比構(gòu)建吉林省褐家鼠的分子進(jìn)化樹。第二部分：用P C R 技術(shù)擴(kuò)增嗜肺軍團(tuán)菌的主要外膜蛋白抗原基因o m