分子生物學(xué)基礎(chǔ)知識

1、素材聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR（生物學(xué)的聚合酶鏈反應(yīng)）一般指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。由1983年美國Mullis首先提出設(shè)想，1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)，即簡易DNA擴增法，意味著PCR技術(shù)的真正誕生。到如今2013年，PCR已發(fā)展到第三代技術(shù)。1973年，臺籍科學(xué)家錢嘉韻，發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的TaqDNA聚

2、合酶，為PCR技術(shù)發(fā)展也做出了基礎(chǔ)性貢獻(xiàn)。PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是利用DNA在體外攝氏95高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(53)的方向合成互補鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實際就是一個溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。真核生物的啟動子真核生物的啟動子由于真核生物中有三種不同的RN

3、A聚合酶，因此也有三種不同的啟動子，其中以啟動子Ⅱ最為復(fù)雜，它和原核的啟動子有很多不同：（1）有多種元件：TATA框，GC框，CATT框，OCT等；（2）結(jié)構(gòu)不恒定。有的有多種框盒如組蛋白H2B；有的只有TATA框和GC框，如SV40早期轉(zhuǎn)錄蛋白，（3）它們的位置、序列、距離和方向都不完全相同，（4）有的有遠(yuǎn)距離的調(diào)控元件存在，如增強子；（5）這些元件常常起到控制轉(zhuǎn)錄效率和選擇起始位點的作用；（6）不直接和RNApol結(jié)合。轉(zhuǎn)錄時先和其

4、它轉(zhuǎn)錄激活因子相結(jié)合，再和聚合酶結(jié)合。(一)Ⅱ類基因的啟動子和調(diào)控區(qū)Ⅱ類基因的啟動子由核心元件和上游元件組成。核心元件包括TATA框和轉(zhuǎn)錄起始位點附近的啟始子（initiat，Inr）。亞克?。ㄓ⒄Z：subcloning）是一種分子生物學(xué)技術(shù)。亞克?。?subclone)分為細(xì)胞克隆和分子克隆。該技術(shù)旨在將目的基因?qū)肽繕?biāo)載體中，以進行進一步研究。值得注意的是，亞克隆和分子克?。╩olecularcloning）不是同一概念。在細(xì)胞克隆

5、中，對培養(yǎng)的細(xì)胞來說，從原有的克隆中，再篩選出具有某種特性的細(xì)胞進行培養(yǎng)，就是亞克隆。在分子克隆中，從大片段的克隆中選取特定小片段再克隆。亞克隆就是初步克隆的外源片段往往較長，含有許多目的基因片段以外的DNA片段，將目的基因所對應(yīng)的一小段DNA找出來。對已經(jīng)獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；

6、(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；(4)重組子篩選。亞克隆技術(shù)：限制性內(nèi)切酶是一類能識別雙鏈DNA分子中特異核苷酸序列的DNA水解酶，該類酶是體外剪切基因片段的重要工具。首先，使用限制酶將目的基因切下。切下來的目的基因需經(jīng)過純化（常用手法是凝膠作用機理[編輯]促卵泡激素的目標(biāo)細(xì)胞表面表達(dá)有促卵泡激素受體，屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族。促卵泡激素與其受體蛋白的結(jié)合將導(dǎo)致后者的構(gòu)象變化。作為跨細(xì)胞膜的膜蛋白，促卵泡激素受體胞外的變構(gòu)將引發(fā)胞內(nèi)的變構(gòu)，改變其與

7、G蛋白的結(jié)合狀態(tài)，并通過其它蛋白的參與，進一步誘發(fā)環(huán)磷酸腺苷等第二信使的生成，將信號傳至細(xì)胞核內(nèi)，實現(xiàn)對蛋白表達(dá)和細(xì)胞發(fā)育進程的調(diào)節(jié)。相關(guān)疾病[編輯]促卵泡激素水平在兒童期較低，而在女性的更年期之后則很高。高促卵泡激素水平[編輯]促卵泡激素的高水平預(yù)示著性腺引發(fā)的限制性反饋(負(fù)反饋)缺失，導(dǎo)致腦垂體不斷合成促卵泡激素。這在女性接近或處于更年期時屬于正?，F(xiàn)象，但對于處于生育年齡的女性則是不正常的，可能是以下疾病的信號：過早絕經(jīng)也稱為卵巢早

8、衰性腺障礙或Turner綜合征閹割斯外爾綜合征先天腎上腺增生的某些病例睪丸失效低促卵泡激素水平[編輯]促卵泡激素分泌水平的降低將導(dǎo)致性腺功能的缺失。在男性精子數(shù)量不足的病癥中尤為典型。在女性中表現(xiàn)為生育周期的停止，具體相關(guān)的疾病有:多卵囊巢綜合征，可能的體征有肥胖，多毛，不育等等；考曼綜合征下丘腦抑制癥垂體機能減退癥泌乳激素過多癥性腺功能低下癥正在接受性腺抑制治療使用促性腺激素釋放激素結(jié)抗劑使用促性腺激素釋放激素促進劑（負(fù)調(diào)節(jié)）醫(yī)療應(yīng)用

9、[編輯]促卵泡激素可在絕經(jīng)期女性的尿液中提取得到，也可以通過基因工程的方法重組表達(dá)得到。臨床用于對不育癥患者的治療，用以刺激卵泡的發(fā)育成熟，同時也用于體外人工受精和體內(nèi)人工受精的相關(guān)治療中。促卵泡激素受體FSHR基因位于人的2號染色體上p21區(qū)，長約2080個核苷酸調(diào)控序列（英語：Regulatysequence，又譯調(diào)節(jié)序列）是DNA中一段包含啟動子、增強子，以及其他可與調(diào)節(jié)蛋白，如轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的位置。這些序列調(diào)控了基因的表現(xiàn)，進而影

10、響蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。除此之外，mRNA也有調(diào)控序列，可與RNA結(jié)合蛋白或其他RNA結(jié)合DNaseI，即DeoxyribonucleaseI，脫氧核糖核酸酶I，是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶。DNaseI水解單鏈或雙鏈DNA后的產(chǎn)物，5端為磷酸基團，3端為羥基。DNaseI活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNaseI可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離