果膠酶法對(duì)翠云草黃酮提取的研究

1、果膠酶法對(duì)翠云草黃酮提取的研究賴紅芳，溫曉娟河池學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系廣西宜州546300摘要：摘要：本文探索果膠酶法提取翠云草中黃酮的工藝條件，用果膠酶提取，采取L9（34）正交試驗(yàn)研究果膠酶用量、酶解時(shí)間、pH值、酶解溫度4個(gè)因素對(duì)黃酮提取率的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，果膠酶法提取翠云草黃酮的最佳提取條件為：果膠酶濃度0.075mgml，酶解時(shí)間2.5h，酶解pH=5.0，酶解溫度50℃。在此條件下，黃酮的平均提取率為1.40%，RSD=2

2、.0%；加樣回收率為95.7%?？梢?，果膠酶法提取翠云草黃酮效果良好。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：翠云草；黃酮；果膠酶；提取工藝StudyonExtractionofFlavonoidsfromSelaginellaUncinataSpringbyPectinEnzymaticMethodLAIHongfang，WENXiaojuepartmentofChemistryLifeSciencesHechiUniversityGuangxiYizhou5

3、46300ChinaAbstract:ToresearchaimedtooptimizetheextractionprocessofFlavonoidsinSelaginellaUncinataSpringbyPectinenzymeextraction.TakeL9(34)thogonalexperimentstudypectinasehydrolysistimepHvaluehydrolysisthetemperatureoffou

4、rfactsontheextractionratebypectinenzymaticmethod.TheexperimentalresultsshowthattheoptimumextractionconditionsfpectinaseextractCuiyungrassflavonoidsasfollows:pectinaseconcentration0.075mgmlhydrolysistime2.5hhydrolysispH=5

5、.0extractiontemperature50℃.Undertheseconditionstheaveragecontentofflavonoidsintheextractwas1.40%RSDwas2.0%therecoveryratewas95.7%.ItisthusclearthatPectinenzymaticextractflavonoidscompoundsofSelaginellauncinataSpringisago

6、odmethods.Keywds:SelaginellauncinataSpring；flavonoids；Pectinenzymatic；Extractiontechnology翠云草Selaginellauncinata(Desv.)Spring.系蕨類卷柏科卷柏屬Selaginella植物，是一種民間應(yīng)用較廣的中草藥，具有清熱利濕、止咳止血、抗菌消炎以及抗腫瘤的作用，對(duì)于黃疸型肝炎、腸炎、痢疾、腎炎水腫、肺結(jié)核咳血、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、

7、癤腫、燙傷、燒傷、跌打損傷、外傷出血等癥的治療，具有較高的藥用價(jià)值，具有抗腫瘤、降血糖、抗菌、增強(qiáng)免疫、鎮(zhèn)痛等多種功效[13]。通過查閱文獻(xiàn)，其主要化學(xué)成分為黃酮類及酚性成分，其中翠云草乙醇提取物具有良好的抗缺氧活性[46]，而其中抗缺氧的活性成分主要為黃酮類化合物[78]。果膠酶是能夠分解果膠物質(zhì)的多種酶的總稱，能夠除去細(xì)胞壁中的果膠質(zhì)，當(dāng)果膠質(zhì)降解時(shí)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分離。在天然產(chǎn)物的提取過程中，果膠酶可以快速脫除果膠，有效地破除植物細(xì)胞壁

8、，使細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)快速、充分的溶解出來。這不僅可以減少溶劑用量，改變提取成分的性質(zhì)，增強(qiáng)藥物活性，還可以有效地提高有效成分的提取率。收稿日期：基金項(xiàng)目：廣西教育廳科研立項(xiàng)項(xiàng)目（編號(hào)：201106LX584）作者簡(jiǎn)介：賴紅芳(1975)，女，壯族，廣西柳州人河池學(xué)院副教授，主要從事天然產(chǎn)物提取及化學(xué)成分1.3.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL、8.0ml于25mL容量瓶中

9、，加入5%NaNO2溶液1.4mL，搖勻，靜置5min后加入10%Al（NO3）3溶液1.4mL，搖勻，靜置5min后加入1molLNaOH溶液10mL，最后以30%乙醇溶液定容，搖勻，靜置20min[910]。在500nm處測(cè)定其吸光度，得回歸方程為：y=11.43x0.0023；R2=0.9991，r=0.9996。1.3.7黃酮化合物的含量測(cè)定精確量取翠云草提取液2mL于25mL的容量瓶中，按照1.3.6的顯色方法進(jìn)行顯色，用空白

10、的NaNO2Al（NO3）3NaOH溶液作為參比液進(jìn)行調(diào)零，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，然后代入回歸方程，計(jì)算出樣品液中黃酮化合物的質(zhì)量濃度，進(jìn)而計(jì)算出黃酮提取率。2結(jié)果與分析2.1單因素提取工藝研究單因素提取工藝研究2.1.1果膠酶用量的選擇精確稱取翠云草粉末2.0000g，加入40ml已用緩沖溶液調(diào)節(jié)好的pH為4.5的溶液后，分別加入濃度為0.75、0.1、0.15、0.2、0.25mgmL的果膠酶，45℃恒溫酶解2h，再進(jìn)行8

11、0℃回流浸提2h，煮沸滅酶，抽濾，合并提取液至100mL容量瓶并用80%乙醇溶液定容。移取提取液2ml至25mL容量瓶中，按照1.3.6的顯色方法進(jìn)行顯色，測(cè)其吸光度，平行測(cè)定3次，取平均值代入回歸方程求總黃酮提取率分別為1.32%、1.43%、1.36%、1.34%、1.37%。翠云草中總黃酮的含量隨著果膠酶濃度的增大而呈上升的趨勢(shì)，在濃度為0.1mgml時(shí)黃酮的提取率最大，當(dāng)果膠酶濃度繼續(xù)增大時(shí)翠云草中測(cè)定出的總黃酮含量呈先下降后有

12、些許升高的趨勢(shì)，出于對(duì)經(jīng)濟(jì)效益的綜合考慮，確定選擇進(jìn)一步優(yōu)化提取條件的果膠酶濃度為0.1mgml。2.1.2酶解最適時(shí)間的選擇稱取翠云草粉末2.0000g，加入40ml已用緩沖溶液調(diào)節(jié)好的pH為4.5的溶液后，加入濃度為0.1mgml的果膠酶，分別在45℃恒溫水浴中酶解1h、1.5h、2h、2.5h、3h，80℃回流浸提2h，煮沸滅酶，抽濾，合并提取液至100mL容量瓶并用80%乙醇溶液定容。移取提取液2ml至25mL容量瓶中，按照1.

13、3.6的顯色方法進(jìn)行顯色，測(cè)其吸光度，平行測(cè)定3次，取平均值代入回歸方程求總黃酮提取率分別為1.01%、1.13%、1.36%、1.30%、1.27%。酶解溫度的大小對(duì)翠云草中黃酮類物質(zhì)的提取有較大的影響，酶解時(shí)間越長(zhǎng)提取率越高，在酶解2h時(shí)黃酮的提取率達(dá)到最大，2h之后黃酮提取率基本變化不大，所以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，可選擇進(jìn)一步優(yōu)化提取條件的酶解時(shí)間為2h。2.1.3酶解最適pH的選擇稱取翠云草粉末2.0000g，加入40ml已用緩沖

14、溶液調(diào)節(jié)好的pH分別為3.5、4、4.5、5、5.5的溶液，加入濃度為0.1mgml的果膠酶，在45℃下恒溫酶解2.5h，80℃回流浸提2h，煮沸滅酶，抽濾，合并提取液至100mL容量瓶并用80%乙醇溶液定容。移取提取液2ml至25mL容量瓶中，按照1.3.6的顯色方法進(jìn)行顯色，測(cè)其吸光度，平行測(cè)定3次，取平均值代入回歸方程求總黃酮提取率分別為1.41%、1.40%、1.42%、1.37%、1.37%。pH的大小對(duì)翠云草中黃酮的提取率影