7酵母菌觀察

1、酵母菌的形態(tài)觀察和子囊孢子的觀察酵母菌的形態(tài)觀察和子囊孢子的觀察作者：李東方學(xué)號200900140049系年級：09級生科一班指導(dǎo)老師：錢衛(wèi)日期：2010.11.15實(shí)驗(yàn)地址：山東大學(xué)生北308一、一、目的要求目的要求1.進(jìn)一步學(xué)習(xí)并掌握光學(xué)顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用方法；2.觀察并掌握酵母菌的細(xì)胞形態(tài)及其子囊、子囊孢子和假菌絲的形態(tài)；3.學(xué)習(xí)并掌握鑒別酵母菌細(xì)胞死活的方法；4.了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌絲觀察的壓片培養(yǎng)法。二、

2、二、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料1.菌種：釀酒酵母（Sacomycescerevisiae）、2.染色液：0.1％美藍(lán)染色液、孔雀綠染色液、95％乙醇等3.其他：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、吸水紙等三、三、基本原理基本原理酵母菌是不運(yùn)動的單細(xì)胞真核微生物，其大小通常比常見的細(xì)菌大幾倍甚至幾十倍，因此，不必染色即可用顯微鏡觀察其形態(tài)。大多數(shù)酵母以出芽方式進(jìn)行無性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌綱中的酵母菌在一定條件下，可產(chǎn)生子囊孢子進(jìn)行有性生殖。美藍(lán)是

3、一種弱氧化劑，氧化態(tài)呈藍(lán)色，還原態(tài)呈無色。用美藍(lán)對酵母細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，活細(xì)胞由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能將美藍(lán)由籃色的氧化態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色的還原態(tài)型，從而細(xì)胞呈無色；而死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則由于細(xì)胞內(nèi)還原力較弱而不具備這種能力，從而細(xì)胞呈藍(lán)色，據(jù)此可對酵母菌的細(xì)胞死活進(jìn)行鑒別。四、四、操作步驟操作步驟1.鑒別酵母菌細(xì)胞死活美藍(lán)染色鑒別酵母菌細(xì)胞死活美藍(lán)染色1）染色：無菌環(huán)境下，在干凈的載玻片中央加一小滴適宜

4、濃度的釀酒酵母液體培養(yǎng)物，加一小滴0.1%美藍(lán)染色液，然后再從側(cè)面蓋上蓋玻片，（注意染色液和菌液不宜過多或過少，并應(yīng)基本等量）。2）鏡檢：將制好的染色片置于顯微鏡的載物臺上，放置約3min后進(jìn)行鏡檢，先用低倍鏡，后用高倍鏡進(jìn)行觀察，根據(jù)細(xì)胞顏色區(qū)分死細(xì)胞（藍(lán)色）和活細(xì)胞（無色），并進(jìn)行記錄。3）比較：染色約30min后再次進(jìn)行觀察，注意死細(xì)胞數(shù)量是否增加。2.子囊孢子的染色與觀察子囊孢子的染色與觀察1）制片：在潔凈載玻片的中央滴一小滴蒸

5、餾水，用接種環(huán)于無菌條件下挑取少許菌至水滴上，涂布均勻，在酒精燈火焰上熱固定（水和菌均不要太多，涂布時(shí)應(yīng)盡量涂開，否則將造成干燥時(shí)間長；熱固定溫度不宜太高，以免使菌體變形）。2）染色：滴加數(shù)滴孔雀綠染色液，11.5min后水洗；加95%乙醇脫色30s，水洗；最后用番紅染液復(fù)染30s1min，水洗，干燥。3）鏡檢：將染色片置于顯微鏡的載物臺上，先用低倍鏡，后用高倍鏡進(jìn)行觀察，子囊孢子呈綠色，菌體和子囊呈粉紅色。注意觀察子囊孢子的數(shù)目、形狀

6、，并進(jìn)行記錄。五、五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.酵母菌的形態(tài)觀察和鑒別酵母菌細(xì)胞死活1）3min后2)30min后出芽生殖出芽生殖死亡菌種占20%死亡菌種占50%細(xì)胞類型活細(xì)胞死細(xì)胞顏色透明藍(lán)色時(shí)間細(xì)胞總數(shù)活細(xì)胞數(shù)死細(xì)胞數(shù)死細(xì)胞百分?jǐn)?shù)3Min36341233.3%30min87325563.2%2.子囊孢子的染色與觀察酵母菌的子囊孢子菌體和子囊子囊孢子菌體和子囊顏色藍(lán)綠色紅色六小結(jié)這次實(shí)驗(yàn)掌握了光學(xué)顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用方法，并觀察并掌握