送檢牛羊病材分離之細(xì)菌性病原

1、2019~2019年送檢牛羊病材分離之細(xì)菌性病原Isolationof,,Abstract,A total of 83 bovine and caprine specimens were submitted. A total of 16 isolates including Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus bovis II, Pasteurella multocida, Mannheim

2、ia haemolytica and Klebsiella pneumonia from 26 cases with pneumonia. Six strains of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from 24 cases with diarrhea. Two strains of A. pyogenes from 22 cases with abortion or re

3、productive disorder.,Two strains of A. pyogenes and 1 strain of Fusobacterium necrophorum from 11 cases with hepatic lesions. Two strains of A. pyogenes and 1 strain of Corynebacterium pseudotuberculosis from 2 cases w

4、ith lymphotitis. One strain of C. pseudotuberculosis from 1 case with spleen abscess. One strain of A. pyogenes from 1 case with peritonitis. One strain of A. pyogenes from 1 case with muscular abscess.,材料與方法,材料來源：各地防治所

5、委託送檢之病材。細(xì)菌分離：一般臟器表面殺菌處理後，以無菌剪刀剪開釣取內(nèi)部細(xì)菌，假設(shè)確定為無菌操作取得之病材，可省去殺菌步驟。假設(shè)自糞材中分離特定細(xì)菌則須多加數(shù)種抗生素及操作手續(xù)，以抑制雜菌生長。細(xì)菌純化：選取單一菌落純化，以利後續(xù)鑑定步驟。,4. 細(xì)菌鑑定：包括使用傳統(tǒng)生化反應(yīng)鑑定法，市售很多商品化套組可供使用，花費時間1-2天；另有依據(jù)細(xì)菌對於各種碳源利用能力而分類的鑑定方法；並以PCR增幅16S rDNA區(qū)域，與基因資料庫進行

6、比對，可當(dāng)作輔助鑑定方法。,結(jié)果,2006年4月到2017年5月間取得牛羊病例83例，其中包括肺炎癥狀26例(31.3%)、下痢癥狀24例(28.9%)、流死產(chǎn)及生殖道病變22例(26.5%)、肝臟病變11例(13.2%) 、衰弱消瘦癥狀4例(4.8%)、淋巴結(jié)炎3例(3.6%)、腎臟病變3例(3.6%)、神經(jīng)癥狀2例(2.4%)、關(guān)節(jié)炎2例(2.4%)、脾膿瘍1例(1.2%)、腹膜炎1例(1.2%)、肌肉化膿灶1例(1.2%)。,肺炎

7、癥狀26例中分離得16株病原菌包括Arcanobacterium pyogenes 7株(43.7%)、Streptococcus bovis II 4株(25%)、Pasteurella multocida 3株(18.7%)、Mannheimia haemolytica 1株(6.2%)、Klebsiella pneumonia 1株(6.2%)。下痢癥狀24例中分離得Mycobacterium avium subsp. para

8、tuberculosis 6株。流死產(chǎn)及生殖道病變22例中分離得A. pyogenes 2株。,肝病變11例中分離得3株病原菌包括A. pyogenes 2株(66.7%)、Fusobacterium necrophorum 1株(33.3%)。其他包括淋巴結(jié)炎3例中分離得3株病原菌包括A. pyogenes 2株(66.7%)、Corynebacterium pseudotuberculosis 1株(33.3%)。脾膿瘍1例中分

9、離得C. pseudotuberculosis 1株。腹膜炎1例中分離得A. pyogenes 1株。肌肉化膿灶1例中分離得A. pyogenes 1株。,2006年到2007年間取得恆春畜產(chǎn)試驗所分所牛羊病例82例，以呼吸道癥狀與其周邊淋巴結(jié)炎、以及多發(fā)性化膿病灶為主，共分離得病原菌41株，包括Str. bovis II 15株(36.6%)、Burkholderia pseudomallei 12株(29.3%)、C. pseudo

10、tuberculosis 7株(17%)、P. multocida 4株(9.7%)、M. haemolytica 2株(4.9%)、A. pyogenes 1株(2.4%)。,病原菌簡介,Arcanobacterium pyogenes舊名Corynebacterium pyogenes, Actinomyces pyogenes等等。 革蘭氏陽性短桿菌，細(xì)小溶血性菌落，無氧狀態(tài)生長比有氧狀態(tài)佳，需培養(yǎng)48小時才有足夠菌量做生化試

11、驗。感染途徑要緊為傷口感染，可感染多種動物，造成多臟器多發(fā)性化膿病變?？股刂委熜Ч患?。,Streptococcus bovis IID族鏈球菌，革蘭氏陽性球桿或是短桿菌，兼性厭氧，普遍存在反芻動物之呼吸道黏膜表面，為機緣性細(xì)菌?？梢鹑祟愋膬?nèi)膜炎。,Pasteurella multocida革蘭氏陰性桿菌，兩極濃染為特徵，氧化酶陽性，巴斯德桿菌在生化反應(yīng)測試上幾乎不利用醣類。培養(yǎng)基上生長成白灰色菌落。呼吸道常在菌，

12、為重要之肺炎病原菌。感染禽類及各種哺乳動物，在哺乳動物的癥狀特徵是爆發(fā)性出血性敗血癥。,Mannheimia haemolytica舊稱Pasteurella haemolytica，革蘭氏陰性桿菌，特性與巴斯德桿菌類似。培養(yǎng)基上生長成白色溶血性菌落。在寒冷或運輸?shù)染o迫因子下產(chǎn)生致害，要緊癥狀為纖維素性肺炎，為重要之反芻動物肺炎病原菌。,Klebsiella pneumonia屬腸內(nèi)菌科，革蘭氏陰性桿菌。培養(yǎng)基上生長成黏

13、性透明菌落。機緣性細(xì)菌，會造成動物之肺炎，在人則是院內(nèi)感染及傷口感染常見之細(xì)菌。,Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis分支桿菌屬，現(xiàn)分類於鳥型分支桿菌內(nèi)，可引起Johne’s disease。使用添加Mycobactin J之蛋黃培養(yǎng)基分離，生長需2個月或更久。感染途徑為由口食入，引起慢性消耗性肉芽腫性腸炎，有冰山效應(yīng)?？赡芘c人類之Crohn’s disease相關(guān)。,Fuso

14、bacterium necrophorum絕對厭氧菌，革蘭氏陰性長絲狀菌。會造成牛羊的喉炎氣管炎(仔牛白喉)、腐蹄及壞死性肝炎，感染部位膿腫惡臭。也可能感染其他哺乳動物，常為二次性感染。,Corynebacterium pseudotuberculosis革蘭氏陽性桿菌，觸媒反應(yīng)陽性，乾躁菌落型態(tài)，需48小時培養(yǎng)。羊隻由皮膚傷口、剪毛等傷口感染，引起局部乾酪性淋巴腺炎、膿血癥或全身性多發(fā)性膿皰。,討論,無法從樣本分離到病原

15、菌之最大緣故為雜菌汙染(尤其是變形菌汙染)，當(dāng)污染嚴(yán)重時，便無法分離到正確之病原菌，汙染緣故包括保存運送錯誤造成樣本腐壞、各臟器混雜保存、採樣時候污染等。其他影響分離因素包括採集之樣本品過小、樣本未採取到病灶處及分離時候操作錯誤等等。此外，養(yǎng)殖戶私用各種抗生素治療也對病原菌之分離有很大之影響。,目前鑑定之方法仍以傳統(tǒng)之生化反應(yīng)為主，可是市售套組常常無法正確鑑定出菌別，因此常會配合碳源利用法及16S序列比對之方式輔助鑑定。所有送檢病

16、例中(不包含恆春試驗所)前三名癥狀為肺炎癥狀26例(31.3%)、下痢癥狀24例(28.9%)、流死產(chǎn)及生殖道病變22例(26.5%)。,所有細(xì)菌分離結(jié)果中以造成化膿病灶之A. pyogenes比例最高(15/33, 45.5%)，緣故可能包括引起之病灶明顯，因此採樣及細(xì)菌分離時目標(biāo)明確；並且此菌可長於厭養(yǎng)環(huán)境及耐抗生素特性，當(dāng)樣本污染及私用抗生素下，仍可利用厭氧將之分離出來。據(jù)其他國家報告，反芻動物肺炎前3名應(yīng)為M. haemoly

17、tica、P. multocida、Histophilus somni。,反芻動物下痢依分離結(jié)果，以副結(jié)核分支桿菌最主，依照此菌特性，必然養(yǎng)殖場中有很大比例之次臨床期動物未被發(fā)現(xiàn)?？赡芤鹆鳟a(chǎn)之細(xì)菌性病原包括布氏桿菌、彎曲菌等，本次結(jié)果中皆未分離到。恆春試驗所牛羊的分離結(jié)果，除去常在菌Str. bovis II 後，前3名為B. pseudomallei 、C. pseudotuberculosis、P. multocida，可提供