山藥細(xì)菌性葉斑病病原的鑒定.pdf

1、山藥細(xì)菌性葉斑病是山藥上發(fā)現(xiàn)的一種新病害，關(guān)于此病害的研究尚未見(jiàn)任何報(bào)道。本研究根據(jù)山藥病株的發(fā)病情況和鏡鑒試驗(yàn)，初步確定為細(xì)菌性病害。 從感病山藥葉片中分離出四株培養(yǎng)性狀不同的細(xì)菌菌株：YLS-1、YLS-2、YLS-3、YLS-4。在適宜條件下回接山藥，只有菌株YLS-2能引起山藥發(fā)病，發(fā)病癥狀與原病葉癥狀一致，并且可以從接菌發(fā)病的山藥葉中再分離出該細(xì)菌，表面性狀與原來(lái)分離的純培養(yǎng)細(xì)菌一致，符合柯赫氏法則，證明細(xì)菌分離物YL

2、S-2為山藥葉斑病的病原菌。 以三種標(biāo)準(zhǔn)菌株2584(CurtobacteriumflaccumfaciensDv.flaccumfaciens)、T30(Cur.f.pv.beticila)和ICMP3023(Pseudomonassyringaepv.syringae)做形態(tài)學(xué)觀察和生理生化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明細(xì)菌分離物YLS-2并和T30及2584親緣關(guān)系較接，推測(cè)它們是近緣種。 利用16SrDNA通用引物，以YLS-2

3、的全序列基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到長(zhǎng)度約為1.5kbp的特異性條帶，將該條帶切膠、回收、克隆并送交測(cè)序，得到長(zhǎng)度為1485bp基因序列，將該序列遞交GenBank進(jìn)行Blast同源序列檢索，在親緣關(guān)系相近的前39個(gè)序列中，前35個(gè)均為短小桿菌屬的菌株。用DNAStar軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)圖顯示山藥葉斑病菌與甜菜銀葉病菌(Curtobacteriumflaccumfacienspv.basellae(登錄號(hào)：AY2732

4、10))單獨(dú)構(gòu)成一個(gè)分支，其同源性高達(dá)98.7％，這就說(shuō)明山藥細(xì)菌性葉斑病菌是萎蔫短小桿菌的一個(gè)變種。 本研究利用ITS(InternalTranscribedSpacers)的通用引物以YLS-2的全序列基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將所得特異性條帶切膠、回收、克隆并送交測(cè)序，得到長(zhǎng)度為501bp基因序列，將該ITS序列遞交GenBank進(jìn)行Blast同源序列檢索，在親緣關(guān)系相近的前9個(gè)序列中，前8個(gè)均為短小桿菌屬的菌株，另外一

5、個(gè)序列不是菌株的序列。其中萎蔫短小桿菌甜菜致病變種(Curtobacteriumf1accumfacienspv.betae)與YLS-2有84.9％同源性。用DNAStar軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)圖顯示該系統(tǒng)樹(shù)中YLS-2萎蔫短小桿菌的另外三個(gè)變種成為一枝，這表明YLS-2是萎蔫短小桿菌的一個(gè)新的致病變種。 綜合山藥斑點(diǎn)落葉病菌的形態(tài)學(xué)觀察和生理生化試驗(yàn)，16SrDNA的序列分析和ITS的序列分析結(jié)果表明，此病菌是萎蔫