結(jié)膜印跡細(xì)胞學(xué)

1、結(jié)膜印跡細(xì)胞學(xué),陳輝美國DEAN A MCGEE 眼科研究所博士后四川省人民醫(yī)院眼科副主任醫(yī)師,,原 理,方 法,CIC的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),CIC的臨床意義,原 理,由于在各種致病因素（如： vit a缺乏，感染，過敏損傷等）的影響下，眼表細(xì)胞（結(jié)膜、角膜上皮、杯狀細(xì)胞）在細(xì)胞間連接和細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞的炎性標(biāo)志的表達(dá)等方面將發(fā)生相應(yīng)改變，這就為對(duì)眼表疾病的檢測提供了病理學(xué)基礎(chǔ)，傳統(tǒng)的思維是對(duì)眼表進(jìn)行刮片等侵入性方式作病理檢查，但其

2、敏感性、特異性均不令人?。?977年，Egbert 在眼科使用醋酸纖維膜（Acetate Cellulose）以來，結(jié)膜印跡細(xì)胞學(xué)（Conjunctibai Impression Cytology）得以迅速發(fā)展。,,①,,原 理,由于醋酸纖維膜為惰性物質(zhì)，不與組織反應(yīng)，無毒性，但具有粘附性，使其成為一種對(duì)眼表疾病進(jìn)行非侵入性病檢的理想工具，然后將所有取下的標(biāo)本與傳統(tǒng)的染色、免疫熒光、過氧化物酶染色、電泳等技術(shù)相結(jié)合，使眼科工作者能夠

3、對(duì)相關(guān)疾病作出早期診斷、治療、預(yù)防。,②,,方 法,（一）傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查：,（二）免疫過氧化物酶染色：,（三）免疫熒光染色：,,目前，傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)染色方法甚多，染色原理基本相同，現(xiàn)僅簡介其中的一種細(xì)胞學(xué)染色方法： 1，用醋酸纖維膜印取結(jié)膜、角膜細(xì)胞、分泌物并固定。 2，按序使用過碘酸、Shiff’s試劑、Mayer’s蘇木精、95%乙醇、100%乙醇進(jìn)行細(xì)胞染色。,（一）傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查：,,①,,（一）傳統(tǒng)細(xì)胞

4、學(xué)檢查：,3，使用透明液（10%乙醇：冰醋酸=7:3體積比）對(duì)纖維膜進(jìn)行透明。 4，載片鏡檢。,②,,（二）免疫過氧化物酶染色：,1，用纖維膜印取標(biāo)本并固定。 2，以磷酸緩沖鹽為浴液，將標(biāo)本先后置于抗體浴液（免抗HSV-1抗體，鼠抗VZX抗體）和商業(yè)用過氧化物酶—抗過氧化物酶試劑盒中培育。 3，鏡檢。,,（三）免疫熒光染色：,1，用纖維膜印取標(biāo)本。 2，將標(biāo)本先后置于第一抗體（鼠抗-VZX抗體）和

5、第二抗體（FITC標(biāo)記的山羊抗鼠IgG抗體中。 3，熒光顯微鏡下鏡檢。 4，相對(duì)應(yīng)，以HLA DR 的單克隆抗體，IgE受體的單克隆抗體為第一抗體，以fluroresccin isothlecyanate標(biāo)記的抗鼠免疫球蛋白抗血清為第二抗體，可檢測細(xì)胞炎性表達(dá)物。,,CIC的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),一、細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià)：,二、免疫過氧化物酶染色（+）：,三、免疫熒光學(xué)評(píng)價(jià)：,,一、細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià),1、評(píng)價(jià)內(nèi)容:,2、Tseng的六級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn):

6、,,1、評(píng)價(jià)內(nèi)容,(1)視野（1-3個(gè)）中杯狀細(xì)胞存在與否及密度。(2)上皮細(xì)胞核形態(tài)改變情況。(3)上皮細(xì)胞核漿(N/C)比值。(4)胞漿染色后顏色變化情況。,,2、Tseng的六級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn):,0級(jí)：為正常細(xì)胞，上皮大小基本一致，胞漿呈藍(lán)綠色，上皮細(xì)胞散在中等量杯狀細(xì)胞，N/C=1:1但需注意杯狀細(xì)胞密度隨取材部位不同而存在生理分布差異。（高-）低：鼻側(cè)瞼結(jié)膜>顳側(cè)>穹隆>角鞏膜緣)Ⅰ級(jí)：杯狀細(xì)胞開始減小，但

7、無角化，杯狀細(xì)胞密度下降，結(jié)膜上皮細(xì)胞輕度擴(kuò)大，胞漿仍呈藍(lán)綠色，N/C=1/2～1/3.Ⅱ級(jí)：杯狀細(xì)胞全部喪失，但無角化，所有結(jié)膜上皮細(xì)胞均擴(kuò)大變扁，胞漿藍(lán)綠色或粉紅色，N/C=1/4.,,①,,2、Tseng的六級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn):,Ⅲ級(jí)：早期輕度角化。所有上皮細(xì)胞胞漿均呈粉紅色，上皮明顯角化，部分胞漿內(nèi)可見角蛋白，N/C=1/6.Ⅳ級(jí)：中度角化，除上述Ⅲ級(jí)改變外，許多細(xì)胞內(nèi)見大量堆積的角蛋白及角質(zhì)透明蛋白顆粒，胞核固縮或崩解成碎片。Ⅴ

8、級(jí)：嚴(yán)重角化，上皮胞漿濃縮，可見大量角蛋白、胞核固縮或崩解成碎片。,②,,三、免疫熒光學(xué)評(píng)價(jià)：,1，正常人：針對(duì)Ⅱ類抗原HLA DR和IgE受體CD23的免疫細(xì)胞學(xué)為陰性，但少數(shù)人孤立的樹突細(xì)胞和抗-HLA DR單克隆抗體強(qiáng)反應(yīng)，但不和抗CD23單克隆抗體反應(yīng)，有<10%的人的標(biāo)本對(duì)抗-HLA DR抗體和/或抗CD23抗體產(chǎn)生小部分細(xì)胞弱反應(yīng)。2，慢性結(jié)膜炎：在大部分結(jié)膜炎中都和單克隆抗體強(qiáng)烈反應(yīng)。在大部分標(biāo)本中，兩種抗體皆反應(yīng)

9、，但 HLA DR陽性細(xì)胞反應(yīng)更常見，在應(yīng)用激素的患者因免疫抑制作用，標(biāo)本可呈陰性。,,①,,三、免疫熒光學(xué)評(píng)價(jià)：,3，淚液缺陷患者：24 名臨床干燥角化異物患者兩種抗體(一).2名Sjogren’s Syndrome患者HLA DR(+)(90-10%的結(jié)膜細(xì)胞)：IgE受體(一) ，（<10%結(jié)膜細(xì)胞陽性Stevens-Johnsen Syndrome患者HLA DR(+),IgE受體（+）（95%的結(jié)膜細(xì)胞陽性）。8

10、個(gè)標(biāo)本淚液缺陷者對(duì)HLA DR,IgE受體示若陽性。4 ，在HSV,VZV,腺病毒感染者，免疫熒光99.5～100%陽性，具有高度特異性、敏感性。,②,,CIC的臨床意義,目前運(yùn)用CIC對(duì)眼表各種疾病的檢測結(jié)果顯示其異常改變?nèi)缦拢?，VitA缺乏?。篊IC分級(jí)多在3-4 級(jí)，該法敏感特異，而傳統(tǒng)的VitA缺乏主要依靠血清測定VitA含量，繁瑣、昂貴，難以廣泛開展，CIC的優(yōu)勢顯而易見。2，Thiel采用改良的免疫印跡細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測

11、HSV,VZV腺病毒眼表感染者，同樣具有高度特異性、敏感性。3，Rivas的研究示：CIC是Sjogern Syndrome的特異敏感檢查方法。,,①,,CIC的臨床意義,4，Adar在研究角膜接觸鏡配戴者（尤其是主訴不適者），CIC顯示：杯狀細(xì)胞數(shù)降低，且在細(xì)胞學(xué)形態(tài)，杯狀細(xì)胞密度，核蛇樣變等方面有顯著改變，顯然通過CIC對(duì)角膜接觸鏡配戴者以及眼表機(jī)械化學(xué)、物質(zhì)損傷的隨訪，評(píng)估有重要意義。5，Baudouin采用間接免疫熒光法在C