益氣活血方對(duì)高脂大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后血管內(nèi)膜增生的影響

1、<p>　　益氣活血方對(duì)高脂大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后血管內(nèi)膜增生的影響</p><p>　　作者：劉彬,胡霞,符逢春,徐慧,劉百祥,劉起勝</p><p>　　【摘要】 目的 觀(guān)察益氣活血方對(duì)高脂大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后血管內(nèi)膜增生的抑制作用。方法 將90只雄性SD大鼠隨機(jī)分為模型組、阿司匹林組及益氣活血方大、中、小劑量組。大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)30 d,造成高脂血癥；然后經(jīng)右股動(dòng)脈

2、穿刺球囊擴(kuò)張損傷大鼠左頸總動(dòng)脈,造成頸總動(dòng)脈管腔的狹窄。手術(shù)前1 d開(kāi)始給藥,每組動(dòng)物于術(shù)后5、14、28 d處死,取損傷頸總動(dòng)脈,常規(guī)固定、包埋、切片,分別做HE染色。結(jié)果 術(shù)后5 d血管狹窄不明顯,術(shù)后14 d和28 d血管內(nèi)膜明顯增厚,管腔狹窄,模型組尤為明顯。益氣活血方干預(yù)后,大劑量組內(nèi)膜增生平均厚度,殘余管腔面積/總管腔面積與模型組相比,P＜0.01,其余各用藥組與模型組相比,P＜0.05,結(jié)論 益氣活血方可顯著抑制高脂大鼠頸

3、總動(dòng)脈球囊擴(kuò)張后所致的血管內(nèi)膜增生,益氣活血方大劑量作用更明顯。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù)；益氣活血；球囊損傷；大鼠</p><p>　　Abstract：Objective To investigate the effect of Yiqi Huoxue prescriptions on prevention of neointima hyperplas

4、ia after carotid artery vascular injury in rats. Methods Ninty male SD rats were randomly divided into 6 groups：the model group, the aspirin group, the low-dose Yiqi Huoxue group, the mid-dose Yiqi Huoxue group and the h

5、igh-dose Yiqi Huoxue group. All of the rats were fed with hypercholesterolemic diet for 30 days, then the 2.0F balloon catheter injury was perfomed through the right femo</p><p>　　Key words：percutaneous coro

6、nary intervention；supplementing Qi and promoting blood circulation；balloon injury；rat</p><p>　　目前,經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈介入治療(percutaneous coronary intervention,PCI)已成為越來(lái)越多冠心病患者的治療選擇。但遺憾的是,PCI術(shù)后存在較高的再狹窄發(fā)生率,嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量和遠(yuǎn)期療

7、效,阻礙了這一技術(shù)進(jìn)一步應(yīng)用和發(fā)展。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,PCI后再狹窄的基本病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí)、氣虛血瘀,臨床上采用益氣活血療法取得了很好的療效[1]。本研究在以往證實(shí)益氣活血方藥可以明顯抑制大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后再狹窄形成的基礎(chǔ)上[2],改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法,采用高脂血癥大鼠,經(jīng)右股動(dòng)脈穿刺球囊擴(kuò)張損傷大鼠左頸總動(dòng)脈,然后在不同時(shí)相點(diǎn)觀(guān)察益氣活血方藥對(duì)高脂血癥大鼠血管內(nèi)膜病理性增生的抑制作用?，F(xiàn)報(bào)道如下。</p><p><

8、b>　　1 實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p><b>　　1.1 動(dòng)物</b></p><p>　　清潔級(jí)雄性SD大鼠90只(購(gòu)自中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),體重350～400 g。</p><p><b>　　1.2 藥物</b></p><p>　　益氣活血方由黃芪

9、25 g、川芎15 g、三七5 g組成。三七粉碎后過(guò)百目篩研成末,川芎采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油,提藥后藥渣和黃芪一起加適量水煎煮2次,藥液合并濃縮至一定濃度,加入三七粉,川芎揮發(fā)油混勻,60Co照射消毒,分別制成0.45、0.9、1.8 g原藥材/mL的湯藥。同時(shí)制成1 mg/mL阿司匹林溶液。</p><p>　　1.3 儀器和試劑</p><p>　　2.0 Fogarty球囊導(dǎo)管

10、(美國(guó)Edwards Lifesciences公司產(chǎn)品)；MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(北航公司產(chǎn)品)LEICA-DM-LB2型雙目顯微鏡(德國(guó)LEICA公司產(chǎn)品)；Shandon325型石蠟切片機(jī)(英國(guó)Shandon公司產(chǎn)品)。</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p><b>　　2.1 分組</b></p>

11、;<p>　　將90只雄性SD大鼠按體重排序編號(hào),根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將動(dòng)物隨機(jī)分成模型組、阿司匹林組及益氣活血方大、中、小劑量組,每組3個(gè)時(shí)相點(diǎn)(5、14、28 d),每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只動(dòng)物。</p><p><b>　　2.2 造模</b></p><p>　　大鼠給予高脂飼料(按每10 kg普通飼料＋100 g膽固醇＋ 2 000 g豬油＋25 g脫氧膽

12、酸鈉＋10 g丙基硫氧嘧啶配制)喂養(yǎng)30 d,造成高脂血癥。球囊擴(kuò)張損傷大鼠頸總動(dòng)脈前1 d用藥組按0.8 mL/(100 g·d)給予中藥或阿司匹林灌胃,模型組按0.8 mL/(100 g·d)生理鹽水灌胃。球囊擴(kuò)張損傷大鼠頸總動(dòng)脈方法見(jiàn)參考文獻(xiàn)[3]。</p><p><b>　　2.3 動(dòng)物取材</b></p><p>　　手術(shù)后分別于第5

13、、14、28日腹腔注射4%戊巴比妥鈉(1.0 mL/kg)麻醉,心臟放血處死大鼠,取其損傷的左頸總動(dòng)脈約1 cm,游離干凈,用4%中性多聚甲醛固定液固定,石蠟包埋,做病理切片,每份標(biāo)本非連續(xù)取4處切片,間斷均勻切片6張,切片厚度約5 μm,標(biāo)本切片后做HE染色。</p><p><b>　　2.4 數(shù)據(jù)處理</b></p><p>　　每個(gè)標(biāo)本觀(guān)察3張切片,在光學(xué)顯

14、微鏡下攝像,然后將圖片輸入MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng),用鼠標(biāo)準(zhǔn)確的勾出內(nèi)、外彈力板和殘余管腔的輪廓,分析測(cè)定40倍物鏡視野下標(biāo)本的殘余血管腔面積和內(nèi)彈力板圍繞面積,根據(jù)內(nèi)彈力板圍繞面積與殘余管腔面積換算而得半徑的差值,計(jì)算出內(nèi)膜增生的平均厚度。每個(gè)數(shù)據(jù)取3個(gè)測(cè)量值的平均值,測(cè)量采用單盲法,測(cè)量者為與本實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)者。</p><p><b>　　3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法</b></p>&l

15、t;p>　　采用SPSS12.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,數(shù)據(jù)以x±s表示,各組均值比較進(jìn)行方差分析,并進(jìn)一步做多個(gè)均數(shù)的兩兩比較,t檢驗(yàn)。</p><p><b>　　4 結(jié)果</b></p><p>　　球囊損傷后5 d各組僅少量?jī)?nèi)膜增厚,40倍物鏡視野下難以勾勒出圖形；14、28 d時(shí)各組內(nèi)膜明顯增厚,血管重構(gòu)。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。表1 益氣活血方對(duì)

16、球囊損傷大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生的影響(略)注：與模型組比較,*P＜0.05,**P＜0.01；與中藥大劑量組比較,△P＜0.05(下同) 表2 益氣活血方對(duì)球囊損傷大鼠頸總動(dòng)脈血管重構(gòu)的影響(略)</p><p><b>　　5 討論</b></p><p>　　血管球囊損傷后再狹窄是血管內(nèi)膜細(xì)胞增殖、死亡、遷移以及細(xì)胞外基質(zhì)合成和降解所致的血管壁結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化過(guò)程,

17、該過(guò)程與生長(zhǎng)因子、血管活性物質(zhì)和血流動(dòng)力學(xué)有關(guān)[4]?，F(xiàn)代臨床及實(shí)驗(yàn)研究顯示,益氣活血類(lèi)中藥有擴(kuò)張血管、增強(qiáng)纖溶酶活性、抗血栓形成以及改變血流動(dòng)力學(xué)等作用,不僅能有效的抑制VSMC增殖及細(xì)胞外基質(zhì)合成,還可以通過(guò)調(diào)高因內(nèi)膜增厚而降低的血流剪切力,從而阻止細(xì)胞骨架重組和細(xì)胞重排[5]。</p><p>　　由本實(shí)驗(yàn)可以看出,高脂血癥大鼠頸總動(dòng)脈球囊擴(kuò)張術(shù)后所致管腔狹窄的病理組織學(xué)改變與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致,即再狹窄形成

18、的主要原因是平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移并增殖,細(xì)胞外基質(zhì)大量形成和血管重構(gòu),故本法造成的狹窄可作為模擬PCI后再狹窄的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,球囊損傷后5 d,損傷大鼠血管僅少量?jī)?nèi)膜增生,隨著時(shí)間延長(zhǎng)內(nèi)膜逐漸增厚,但給予中藥干預(yù)后內(nèi)膜增長(zhǎng)明顯變緩。益氣活血方大劑量組大鼠術(shù)后14、28 d內(nèi)膜增生平均厚度,殘余管腔面積/總管腔面積與模型組相比,P＜0.01；其余各用藥組與模型組相比,P＜0.05；而且量效關(guān)系顯示,劑量越大抑制作用越顯著。說(shuō)明

19、益氣活血方可顯著防止或減輕球囊擴(kuò)張高脂大鼠頸總動(dòng)脈所致的血管內(nèi)膜增生和狹窄。</p><p>　　中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,PCI后再狹窄屬“胸痹”范疇,其病位在心之絡(luò)脈,基本病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí),本虛以臟氣虧虛為主,標(biāo)實(shí)以血瘀多見(jiàn)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們認(rèn)為,益氣活血是治療PTCA術(shù)后再狹窄的基本大法,其他任何治法,雖據(jù)辨證論治各有側(cè)重,但都應(yīng)以益氣活血為必不可少的治療基礎(chǔ)。不過(guò),由于再狹窄病理機(jī)制復(fù)雜,以及中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)的

20、特點(diǎn),益氣活血方防止或減輕再狹窄的機(jī)制有待進(jìn)一步深入臨床和實(shí)驗(yàn)研究。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　[1] 張 艷.益氣活血復(fù)方防治PTCA術(shù)后再狹窄臨床觀(guān)察[J].中外健康文摘·臨床醫(yī)師,2007,4(11)：32－33.</p><p>　　[2] 劉 彬,劉華峰,程 偉.益氣活血方對(duì)大鼠頸

21、總動(dòng)脈球囊損傷后血管壁的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2007,25(9)：1929－1931.</p><p>　　[3] 劉 彬,程 偉.大鼠新型頸總動(dòng)脈球囊損傷后狹窄模型的建立及其動(dòng)態(tài)病理學(xué)觀(guān)察[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2007,17(5)：269－271.</p><p>　　[4] 顧水明,魏 盟,張昀昀,等.水飛薊賓對(duì)實(shí)驗(yàn)兔球囊損傷后內(nèi)膜增生的影響[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,200