水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)畢業(yè)論文

1、<p>　　本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）</p><p>　　題 目飼料脂肪水平對(duì)大鱗副泥鰍幼魚GPT、GOT活性的影響</p><p>　　系 別 水 產(chǎn) 系 </p><p>　　專 業(yè) 水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué) </p><p>　　年 級(jí)

2、 2012級(jí) </p><p>　　學(xué) 號(hào) 222012602043074 </p><p>　　姓 名 吳 雙 </p><p>　　指 導(dǎo) 教 師 向梟（副教授） </p><p>　　成 績(jī)

3、 </p><p>　　二O一六 年 三 月</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　任務(wù)書3</b></p><p><b>　　文獻(xiàn)綜述4</b></p><p&

4、gt;<b>　　開題報(bào)告12</b></p><p><b>　　正 文15</b></p><p><b>　　摘 要15</b></p><p><b>　　前 言15</b></p><p><b>　　材料與方

5、法16</b></p><p><b>　　結(jié)果與分析18</b></p><p><b>　　討 論19</b></p><p><b>　　結(jié) 論20</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)21</b></

6、p><p><b>　　致 謝22</b></p><p>　　指導(dǎo)教師評(píng)閱表23</p><p><b>　　交叉評(píng)閱表24</b></p><p>　　西南大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）任務(wù)書</p><p>　　論文（設(shè)計(jì)）題目 飼料脂肪水平對(duì)大鱗副泥鰍幼魚GPT

7、、GOT活性的影響 </p><p>　　系別、專業(yè) 水產(chǎn)系、水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué) 學(xué)生姓名 吳雙 學(xué)號(hào) 222012602043074 </p><p>　　指導(dǎo)教師姓名 向梟（副教授） 開題日期 2015年 月 日 </p><p>　　注：1、任務(wù)書由指導(dǎo)老師填寫。 2、任務(wù)書必須在第七學(xué)期13周前下達(dá)

8、給學(xué)生。</p><p><b>　　文獻(xiàn)綜述</b></p><p>　　脂肪的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及對(duì)魚類免疫能力的影響</p><p><b>　　吳雙</b></p><p>　　西南大學(xué)榮昌校區(qū)，重慶榮昌 402460</p><p>　　摘要：脂肪在水產(chǎn)飼料中是重要的脂肪供給

9、源，添加量過高或過低都不利于魚類的健康與生長(zhǎng)。脂肪營(yíng)養(yǎng)攝入量，能夠影響白蛋白的調(diào)節(jié)功能及球蛋白的運(yùn)輸功能，從而改變魚體免疫能力。飼料脂肪消化吸收進(jìn)入血液后，通過合成白蛋白來參與血液物質(zhì)代謝和產(chǎn)生反饋機(jī)制來改變血液滲透壓。轉(zhuǎn)氨酶（aminotransferase）是催化氨基酸與酮酸之間氨基轉(zhuǎn)移的一類酶。當(dāng)肝細(xì)胞受到外來損傷時(shí)，細(xì)胞膜的通透性加大，大量GPT 和GOT 滲入了血液，肝的GPT和GOT活性會(huì)明顯下降，而血液中GPT和GOT活性

10、升高。因此，轉(zhuǎn)氨酶可作為脂肪對(duì)魚類肝臟影響的指標(biāo)，其在魚類在魚體內(nèi)的代謝過程及調(diào)控機(jī)制等方面研究尚少，現(xiàn)就對(duì)脂肪營(yíng)養(yǎng)生理及其對(duì)魚類免疫能力的影響做一綜述。</p><p>　　關(guān)鍵詞：水產(chǎn)飼料；脂肪；谷丙轉(zhuǎn)氨酶；谷草轉(zhuǎn)氨酶</p><p>　　脂肪是脂肪、油、類酯的總稱，包括甘油三脂、膽固醇、磷脂、蠟脂和許多其它種類的分子，脂肪這類復(fù)合物在水產(chǎn)飼料中起著不可替代的作用。飼料脂肪的含量和種類

11、對(duì)養(yǎng)殖魚的生長(zhǎng)、飼料成本及成品魚質(zhì)量和健康都具有密切的聯(lián)系。Sebahattinctal等[1]研究表明，脂肪可以給魚類提供大量的能量，當(dāng)脂肪攝入量不足時(shí)，魚類就會(huì)分解蛋白質(zhì)來為魚體提供生命活動(dòng)所必要的能量，因此，在一定程度上來說，脂肪可以節(jié)約蛋白質(zhì)的用量，從而降低飼料蛋白系數(shù)，節(jié)約養(yǎng)殖成本。同時(shí)，脂肪還能夠?yàn)轸~類提供必需脂肪酸，其中不飽和脂肪酸尤為重要，雖然高的脂肪含量可以加快魚類的生長(zhǎng)，但長(zhǎng)期喂食高脂肪飼料會(huì)導(dǎo)致魚類代謝紊亂，體內(nèi)脂

12、肪堆積，在某些魚類中能夠引起脂肪肝，最終因肝壞死或出血而死亡，嚴(yán)重影響?zhàn)B殖效益。</p><p>　　1 魚類脂肪的消化吸收</p><p>　　魚類日常攝食的脂肪脂肪以甘油三酯為主，進(jìn)入消化道后就會(huì)被脂肪酶水解為游離脂肪酸（FFA）和單酸甘油（2-MG），與膽汁鹽、膽固醇、磷脂等組成直徑約10 nm的混合微粒，當(dāng)進(jìn)入腸道后甘油和FFA就會(huì)從混合微粒中彌散出來，進(jìn)入上皮細(xì)胞[2]。在腸上皮

13、細(xì)胞內(nèi)，碳原子數(shù)大于10的FFA會(huì)形成脂酸輔酶A的衍生物（fatty acyl-CoA derivatives），與2-MG一起參與再酯化過程，而碳原子數(shù)小于10的FFA會(huì)慢慢融入到血液，伴隨著血液循環(huán)到達(dá)肝臟后再被裝配成為脂蛋白的組成部分，參與脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)[3]。腸上皮細(xì)胞中的再酯化過程主要有兩條途徑：一、甘油-酸酯途徑（monoglyceride pathway），于光滑內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行，合成甘油三酯，二、L-α-甘油磷酸酯途徑（L-α-gl

14、ycerophosphate pathway），于粗糙內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和光滑內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行，合成甘油三酯和磷脂[4]。再酯化過程所重組的脂類物質(zhì)將與脂蛋白結(jié)合，經(jīng)由淋巴系統(tǒng)最終匯入血液循環(huán)。同樣儲(chǔ)存在脂肪細(xì)胞中的脂肪，在機(jī)體需要的時(shí)候也會(huì)被脂肪酶逐步水解為FFA和甘油釋放進(jìn)入血液。脂肪組織中因缺乏甘油激酶而不能使甘油分解，因此</p><p>　　脂肪在魚體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)主要分外源性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和內(nèi)源性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑（圖1）[6]。<

15、/p><p>　　圖1 外生及內(nèi)生脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)示意圖</p><p>　　Fig.1 Endogenous and exogenous lipid transport pathways</p><p>　　內(nèi)源性脂類或食物中脂類主要由脂蛋白脂酶負(fù)責(zé)將其轉(zhuǎn)運(yùn)到機(jī)體周邊組織，然后脂蛋脂酶（LPL）降解這些組織內(nèi)富含甘油三酯（TG）的脂蛋白（CM和VLDL）。在外源性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑

16、中，脂蛋白中的TG經(jīng)過LPL水解逐漸變小并最終轉(zhuǎn)化為富含膽固醇酯及apoE等的CM殘粒，這些殘粒通過apoE受體途徑被肝臟攝取，其中膽固醇以非酯化的形式排入膽汁或直接用于膽汁酸的合成。在內(nèi)源性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑中，肝臟在食物中膽固醇充足時(shí)，利用CM殘粒中膽固醇合成VLDL。VLDL分泌進(jìn)入血液會(huì)從高密度脂蛋白（HDL）獲得apoCII并激活LPL，后者使其TG逐步水解，轉(zhuǎn)變?yōu)橹忻芏戎鞍祝↖DL），其中大部分IDL會(huì)通過肝細(xì)胞膜的apoE受體

17、途徑被肝臟攝取，另外一部分IDL則在LPL的作用下進(jìn)一步水解為L(zhǎng)DL[7]。</p><p>　　2 魚類脂肪的營(yíng)養(yǎng)生理功能</p><p>　　蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物統(tǒng)稱為魚類三大能量物質(zhì)。蛋白質(zhì)是生物體的重要組成成分，是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，在生命活動(dòng)中起著重要作用。碳水化合物是自然界分布十分廣泛的一類有機(jī)物，也是魚類飼料中最廉價(jià)的供能物質(zhì)，同時(shí)在飼料的配制中也可以當(dāng)做飼料粘合劑使用。脂肪

18、在魚的生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖等過程中起著重要作用。概括而言，脂肪對(duì)魚類主要生理功能有：</p><p><b>　　2.1 供能</b></p><p>　　魚類所需營(yíng)養(yǎng)素中脂肪含能量最高，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于糖類和蛋白質(zhì)，其產(chǎn)熱效率是蛋白（23.64 kJ/g）的1.7倍，碳水化合物（17.15 kJ/g）的2.4倍。與陸生哺乳動(dòng)物相似，魚類體內(nèi)脂肪也是主要通過氧化作用釋放能量供給機(jī)體

19、需要，所有的脂肪酸都可以通過β-氧化作用產(chǎn)生能量。據(jù)測(cè)算每克脂肪在魚體內(nèi)氧化可釋放出37.62 kJ的能量，所以說水產(chǎn)動(dòng)物體脂是其機(jī)體的“燃料倉庫”，在機(jī)體需要時(shí)可直接分解供能。脂肪組織不僅含水量低，而且占體積小，因此，儲(chǔ)存脂肪是魚類貯存能量用以抗寒的最好形式。此外，脂肪除了供應(yīng)自身的熱能外，還可以促進(jìn)其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收從而提高其代謝能。</p><p><b>　　2.2 載體</b>&l

20、t;/p><p>　　維生素主要分脂溶性和水溶性兩大類，其中脂溶性維生素主要包括A、D、E、K，這些維生素只有溶在脂肪中才能被機(jī)體吸收利用。當(dāng)飼料脂肪不足和缺乏時(shí)不僅會(huì)影響魚體的生長(zhǎng)，而且還極易造成魚體維生素缺乏癥。</p><p><b>　　2.3 保護(hù)</b></p><p>　　魚體組織和細(xì)胞中都含有一定量的脂肪，它不僅有利于維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)

21、的完整性，而且在各器官和神經(jīng)中間能形成一定的保護(hù)層，避免其受到擠壓、摩擦等機(jī)械傷害[8]。</p><p><b>　　2.4 提供EFA</b></p><p>　　那些魚體生長(zhǎng)所必需而又不能自身合成或合成不足，只能從餌料中獲取的脂肪酸被稱為必需脂肪酸（EFA）。從其化學(xué)組成看，EFA均系含有兩個(gè)或兩個(gè)以上雙鍵的不飽和脂肪酸，而在各種脂肪中，大多數(shù)只有在18碳以上的

22、脂肪酸才具有兩個(gè)或以上雙鍵，通常定義18碳以上且具有2個(gè)或以上不飽和鍵的脂肪酸為多不飽和脂肪酸（PUFA），PUFA主要有C18：2ω6、C18：4ω3、C20：4ω6、C20：5ω3、C22：5ω3、C22：6ω3等，其中20碳以上的PUFA為高不飽和脂肪酸（HUFA）。不同的魚類必需脂肪酸的需求也不一樣，溫水性魚類對(duì)n-3或n-6系列不飽和脂肪酸或兩者的混合物需求多一些[9]；冷水性魚類則更需要n-3系列不飽和脂肪酸；大多數(shù)海水魚類

23、所必需的脂肪酸被認(rèn)為主要有二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）和花生四烯酸（AA），與淡水魚不同的是海水魚類缺乏利用十八碳高不飽和脂肪酸的能力。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)魚類缺乏EFA時(shí)會(huì)造成生長(zhǎng)緩慢、飼料利用率下降、死亡率上升和免疫力低下等一系列綜合癥。</p><p><b>　　2.5 節(jié)約蛋白質(zhì)</b></p><p>　　脂肪是含能量最高的營(yíng)養(yǎng)素，飼料中添加一

24、定的脂肪可以替代等能的蛋白質(zhì)和碳水化合物。當(dāng)飼料中可消化能較低時(shí)添加適宜脂肪可提高總消化能，減少了作為能量消耗掉的蛋白質(zhì)含量，使更多的蛋白得以沉積，從而發(fā)揮脂肪對(duì)蛋白質(zhì)的節(jié)約效應(yīng)[10]。這種現(xiàn)象在肉食性魚類中表現(xiàn)尤為明顯，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)虹鱒（Oncorhynchus mykiss）飼料中脂肪水平從10%提高到15-20%，蛋白質(zhì)可從48%降到35%而不影響虹鱒的生長(zhǎng)，進(jìn)而還發(fā)現(xiàn)在脂肪18%蛋白質(zhì)35%時(shí)其蛋白質(zhì)效率（PER）、凈蛋白質(zhì)利用

25、率（NUP）都達(dá)到最佳[11]。對(duì)美洲鮎（Hypostomus plecostomus）進(jìn)行研究后也發(fā)現(xiàn)，如果飼料脂肪由5%提升到15%，蛋白質(zhì)需求可由40%降至36%，且日增重率提高了5%，魚體所需蛋白質(zhì)降低17%[12]。日本靜岡水試在日本鰻鱺（Anguilla japonica）飼料中添加油脂發(fā)現(xiàn)同等條件下可節(jié)約蛋白質(zhì)17.5%-21.2%。雖然有報(bào)道，飼料中添加20.25%的脂肪時(shí)，鯉魚飼料蛋白質(zhì)可由40%減至30%-35%[1

26、3]，但雜食性魚類脂肪節(jié)約蛋白質(zhì)的效果沒有肉食性魚類明顯，一方面可能是因?yàn)檫@類魚對(duì)</p><p>　　3 飼料脂肪水平對(duì)魚類免疫酶活性的影響研究進(jìn)展</p><p>　　3.1 飼料脂肪水平對(duì)魚類免疫能力的影響</p><p>　　免疫酶活性能反映魚類的抗病能力，與營(yíng)養(yǎng)狀況密切相關(guān)。王愛民等[14]對(duì)吉富羅非魚(Oreochromis  spp

27、 )研究發(fā)現(xiàn)，飼料脂肪含量為1.73%組飼料吉富羅非魚血液中總蛋白、白蛋白和球蛋白的含量較大，白蛋白濃度和白球比顯著高于3.71%組，血液中的白蛋白的主要功能是維持血液中膠體的滲透壓，而球蛋白主要參與之類或脂溶性物質(zhì)的運(yùn)輸以及機(jī)體免疫反應(yīng)[15]，其機(jī)制可能是魚油營(yíng)養(yǎng)消化吸收進(jìn)入血液后，參與血液物質(zhì)代謝或產(chǎn)生反饋機(jī)制，從而改變血液滲透壓，魚體通過合成白蛋白來調(diào)節(jié)。當(dāng)飼料脂肪水平在一定范圍內(nèi)，白蛋白和球蛋白都隨脂肪水平提高而呈逐

28、漸上升的變化趨勢(shì)，說明脂肪營(yíng)養(yǎng)攝入量，能夠影響白蛋白的調(diào)節(jié)功能及球蛋白的運(yùn)輸功能，改變魚體免疫能力。在人類血液中，甘油三酷的升降往往伴隨著膽固醇的升降[16]，吉富羅非魚血液中甘油三醋和膽固醇濃度都隨著飼料脂肪水平增加而提高，其中膽固醇濃度比甘油三醋更容易受飼料脂肪水平影響[14]。堿性磷酸酶和營(yíng)養(yǎng)免疫相關(guān)，在正常情況下，血清堿性磷酸酶活性是很低的，當(dāng)有肝臟病或骨病時(shí)，血清堿性磷酸酶活性會(huì)顯著升高[17]。從脂肪對(duì)血液甘油三酷、堿性磷酸

29、酶等指標(biāo)影響分析</p><p>　　血液中的脂肪主要包括甘油三酯、膽固醇、磷脂和自由脂肪酸等。飼料脂肪的消化和吸收過程必須經(jīng)過血液循環(huán)才能運(yùn)送到其它組織器官，而魚體內(nèi)貯存的脂肪也必須經(jīng)過血液的運(yùn)輸作用才能被動(dòng)用，因此，魚體血液脂肪水平可以在一定程度上反映整個(gè)魚體脂肪代謝的狀況[18]。EPA、DHA 和亞油酸等多不飽和脂肪酸會(huì)引起血液膽固醇和LDL-膽固醇含量的下降，而飽和脂肪酸則可以使血液中膽固醇和LDL-膽

30、固醇含量提高[19]。杜震宇等[20]研究發(fā)現(xiàn)，草魚(Ctenopharyngodon idellus)長(zhǎng)期攝食高脂肪飼料后，血清甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量均顯著升高。王愛民等[14]在吉富羅非魚上的研究發(fā)現(xiàn)，血液中甘油三酯和膽固醇含量隨著飼料脂肪水平升高而增加，這說明了在高脂肪飼料組的內(nèi)源性脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)更加積極；隨著飼料脂肪水平的提高，吉富羅非魚血液中的白蛋白和球蛋白含量也有上升，這說明，飼料中的脂肪含量可以影響到白

31、蛋白和球蛋白的代謝，改變魚體的免疫能力。 </p><p>　　3.2 飼料脂肪水平對(duì)魚類轉(zhuǎn)氨酶活性的影響研究進(jìn)展</p><p>　　轉(zhuǎn)氨酶（aminotransferase）是催化氨基酸與酮酸之間氨基轉(zhuǎn)移的一類酶。普遍存在于動(dòng)物、植物組織和微生物中，心肌、腦、肝、腎等動(dòng)物組織以及綠豆芽中含量較高。轉(zhuǎn)氨酶參與氨基酸的分解和合成。此酶催化某一氨基酸的α-氨基酸轉(zhuǎn)移到另一α-酮酸的酮基上，生

32、成相應(yīng)的氨基酸，原來的氨基酸則轉(zhuǎn)變成α-酮酸。</p><p>　　轉(zhuǎn)氨酶的種類很多，體內(nèi)除賴氨酸、蘇氨酸之外，其余α－氨基酸都可參加轉(zhuǎn)氨基作用并各有其特異的轉(zhuǎn)氨酶。其中以谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）最為重要。前者是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉(zhuǎn)氨作用，后者是催化谷氨酸與草酰乙酸之間的轉(zhuǎn)氨作用。轉(zhuǎn)氨酶催化的反應(yīng)都是可逆的。轉(zhuǎn)氨酶可按底物的不同分成3大類。L-a-氨基酸（酮酸轉(zhuǎn)氨酶）、ω- 氨基酸（酮酸轉(zhuǎn)

33、氨酶）和D-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶。轉(zhuǎn)氨酶的輔基是磷酸吡哆醛或磷酸吡哆胺，兩者在轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)中可互相變換。谷丙轉(zhuǎn)氨酶( GPT ) 和谷草轉(zhuǎn)氨酶( GOT) 是廣泛存在于動(dòng)物線粒體中的重要的氨基酸轉(zhuǎn)氨酶，在機(jī)體蛋白質(zhì)代謝中起重要作用，尤其以肝臟GPT 和GOT 含量豐富，參與氨基酸代謝[21, 22]。GPT 和GOT 是目前發(fā)現(xiàn)的活性最高的2 種轉(zhuǎn)氨酶，其活性變化與肝細(xì)胞的炎癥、變性和壞死等密切相關(guān)。</p><p>　　

34、當(dāng)肝細(xì)胞受到外來損傷時(shí)，細(xì)胞膜的通透性加大，大量GPT 和GOT 滲入了血液，肝的GPT和GOT活性會(huì)明顯下降，而血液中GPT和GOT活性升高[22, 23]。谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著提高，能夠加快尿素生成，減少氨基酸代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的毒害[24]。轉(zhuǎn)氨酶活性越大，氨基酸轉(zhuǎn)換作用越強(qiáng)，聯(lián)合脫氨作用越易進(jìn)行，氨基酸的氧化分解也越強(qiáng)，即轉(zhuǎn)氨酶活性大小反映了氨基酸氧化代謝強(qiáng)度的大小。</p><p>　　當(dāng)飼料脂肪

35、含量過高，將導(dǎo)致脂肪在魚體肝臟、腹腔等處沉積，引起魚類代謝紊亂和[25]，甚至導(dǎo)致脂肪肝的產(chǎn)生[26]，破壞肝細(xì)胞的完整性。最終導(dǎo)致肝的GPT和GOT活性會(huì)明顯下降，血液中GPT 和GOT 活性升高。林仕梅等[27]對(duì)羅非魚研究表明飼料脂肪水平增加，羅非魚的肝胰臟GPT和GOT酶活性顯著降低。因此，轉(zhuǎn)氨酶可作為脂肪對(duì)魚類肝臟影響的指標(biāo)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></

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51、t;<p>　　西南大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開題報(bào)告</p><p>　　說明：開題報(bào)告應(yīng)在教師指導(dǎo)下由學(xué)生獨(dú)立撰寫。在畢業(yè)論文（畢業(yè)設(shè)計(jì)）開始二周內(nèi)完成，交指導(dǎo)教師審閱，并接受學(xué)校和系檢查。</p><p>　　飼料脂肪水平對(duì)大鱗副泥鰍幼魚GPT、GOT活性的影響</p><p><b>　　吳雙</b></p>

52、<p>　　西南大學(xué)水產(chǎn)系 重慶榮昌 402460</p><p>　　摘要：本試驗(yàn)旨在研究不同飼料脂肪水平對(duì)大鱗副泥鰍幼魚轉(zhuǎn)氨酶活性的影響。選用大鱗副泥鰍幼魚[初始均質(zhì)量（0.15±0.01）g]1620尾，隨機(jī)分成6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)90尾魚，分別投喂脂肪水平為2.50%、4.49%、6.48%、8.47%、10.46%和12.45%的試驗(yàn)飼料，養(yǎng)殖時(shí)間為60 d。結(jié)果表明：隨

53、著飼料脂肪水平的升高，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）均呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，且均在飼料脂肪含量為6.48%的試驗(yàn)組達(dá)到最大，分別為38.22 U/mg和30.22 U/mg；通過二次回歸方程可知，GPT和GOT取得最大值時(shí)脂肪水平分別為5.97%和5.12%。說明一定脂肪水平可促進(jìn)大鱗副泥鰍幼魚肝胰臟轉(zhuǎn)氨酶的活性，本試驗(yàn)條件下，其飼料的適宜脂肪水平為5.12%-5.97%。</p><p>　　關(guān)

54、鍵詞： 大鱗副泥鰍；脂肪水平；GPT；GOT</p><p>　　Effects of dietary lipid levels on transaminase of juvenile paramisgurnus dabryanus</p><p>　　Wu Shuang </p><p>　　Department of Fisheries, Southwest U

55、niversity, Rongchang, Chongqing 402460, China.</p><p>　　Abstract: This experiment was aimed to investigate the effects of dietary lipid level on transaminase of juvenile Paramisgurnus dabryanus. Six diets we

56、re formulated by containing 2.50%, 4.49%, 6.48%, 8.47%, 10.46%, and 12.45% lipid level. Each diet was fed to triplicate groups of 90 fish with an initial body weight of 0.15±0.01g for 60 d. The results showed that w

57、ith the increasing of dietary lipid levels, alanine aminotransferase (GPT) and aspartate transaminase (GOT) showed a trend of first in</p><p>　　Key words: Paramisgurnus dabryanus; lipid levels; GPT;GOT</p

58、><p><b>　　前言</b></p><p>　　眾所周知，脂肪是水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)重要的貯能物質(zhì)。高密度精養(yǎng)模式的可持續(xù)發(fā)展，要求采用以高脂肪提供能量來節(jié)約蛋白質(zhì)的策略，進(jìn)而達(dá)到降低氮、磷排放，保護(hù)養(yǎng)殖水環(huán)境的目的。但當(dāng)飼料中脂肪水平超過需求量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致脂肪魚體肝臟中的沉積增加，甚至?xí)霈F(xiàn)脂肪肝[1]。當(dāng)魚類肝臟病變時(shí)(如脂肪肝)，由于肝組織的損傷，導(dǎo)致肝細(xì)胞破壞或細(xì)胞

59、膜通透性增加，致使肝細(xì)胞中的酶滲入血液，使血液中的酶活性增加[1]。</p><p>　　肝臟是魚類的重要器官，在物質(zhì)能量代謝過程中具有特殊功能。朱秋鳳[2]對(duì)肉雞的研究發(fā)現(xiàn)，大豆磷脂能顯著降低其血清GPT酶活性，增加其肝臟GPT活性，但對(duì)GOT活性無顯著影響。王媛等[3]用高效氯氰菊酯暴露鯽魚，血漿GPT和GOT的活性升高。Sastry等[4]用氯化汞處理翠鱧后，血漿GPT和GOT活性升高。陳玉春[5]在飼料中

60、添加5種中草藥飼養(yǎng)鯉魚發(fā)現(xiàn)，中草藥能顯著提高鯉魚GPT和GOT的活性。李曉岑[6]研究發(fā)現(xiàn)，冬蟲夏草干粉可降低肝硬化大鼠血清中GPT和GOT活性。賈寶賢[7]對(duì)小鼠研究發(fā)現(xiàn)，525 mg/kg的天麻粉能顯著降低高脂小鼠GPT。但目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于轉(zhuǎn)氨酶的研究主要集中在高毒性物質(zhì)和保健藥品及中草藥上，關(guān)于飼料脂肪對(duì)其的影響研究報(bào)道還較少。</p><p>　　大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）

61、，隸屬鯉形目（Cypriniformes）、鰍科（Cobitidae）、副泥鰍屬（Paramisgurnus）。具有生長(zhǎng)速度快，抗病能力強(qiáng)，成活率高等優(yōu)點(diǎn)[8]。且其味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富[9]，有較大的市場(chǎng)推廣價(jià)值。本文以大鱗副泥鰍以研究對(duì)象，擬探討飼料脂肪水平對(duì)其轉(zhuǎn)氨酶活性的影響，旨在豐富其營(yíng)養(yǎng)免疫生理學(xué)，為開發(fā)其配合飼料提供理論參考。</p><p><b>　　1 材料和方法</b>

62、;</p><p><b>　　試驗(yàn)飼料</b></p><p>　　試驗(yàn)飼料以魚粉、豆粕等為蛋白源，豆油為脂肪源，以次粉和α-纖維素平衡飼料配方調(diào)節(jié)能量水平。分別添加0、2%、4%、6%、8%、10%豆油設(shè)計(jì)出6 種的等氮等能試驗(yàn)飼料（脂肪水平分別為2.50%、4.49%、6.48%、8.47%、10.46% 和12.45%）。飼料原料經(jīng)粉碎后過60 目篩，按照配比

63、稱重并混合均勻后將粉料置于-4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆??；A(chǔ)試驗(yàn)飼料組成見表1。</p><p>　　表1 基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)組成（%干物質(zhì)）</p><p>　　Tab. 1 Formulation and proximate compositions of basal diets (% dry matter) </p><p>　　注：*復(fù)合預(yù)

64、混料為每1 kg 飼料提供的維生素和礦物元素: 維生素C 200 mg； 維生素A 30 000 IU； 維生素E 600 mg； 維生素D325 000 IU；維生素B150 mg，維生素B260 mg； 維生素K 100 mg；煙酸 100 mg；維生素B640 mg；維生素Bl2 0.2mg;泛酸鈣 120 mg；葉酸20mg； 生物素 7 mg；肌醇 250 mg；CuSO4·5H2O 7.20g；MnSO4·

65、;H2O 5.16g，F(xiàn)eSO4·7H2O 122.0g; ZnSO4·7H2O 15.56 g；NaSeO32.10 g；KI 6.58 g。</p><p>　　Notes: *The compound premix provides vitamin and mineral for a kilogram of diets: VC 200 mg，VA 30 000 IU, VE 600 mg

66、, VD325 000 IU, VB150 mg,VB260 mg,VK 100mg, nicotinic acid 100 mg, VB640 mg,VBl2 0.2 mg,Calcium Pantothenate 120 mg, folic acid 20 mg, Biotin 7mg, inositol 250 mg, CuSO4·5H2O 7.20 g,MnSO4·H2O 5.16 g, FeSO4·

67、;7H2O 122.0g,NaSeO3 2.10 g, ZnSO4·7H2O 15.56 g,KI 6.58 g．</p><p>　　1.2 試驗(yàn)魚及飼養(yǎng)管理</p><p>　　試驗(yàn)魚購(gòu)自榮昌祥光泥鰍養(yǎng)殖場(chǎng)，為同一批繁殖的幼魚。購(gòu)回后先用3%的食鹽水消毒后于暫養(yǎng)池（暫養(yǎng)池尺寸1.2 m×0.5 m×0.8 m）中暫養(yǎng)7d，選擇健康、無傷病，體重為（0.1

68、5±0.01 g）的大鱗副泥鰍幼魚1620尾，隨機(jī)分為6個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)90尾魚，并分別放入18個(gè)水泥池中（1.2 m×0.5 m×0.8 m），分別投喂脂肪水平不同的6 種試驗(yàn)飼料，每天表觀飽食投喂3 次（07: 00，12: 00，17: 00）。整個(gè)試驗(yàn)持續(xù)60 d。養(yǎng)殖期間，每天于17:00~19:00用曝氣后的自來水換水1/3。每日監(jiān)測(cè)水質(zhì)、水溫、試驗(yàn)魚的死亡數(shù)量和攝食行為等。養(yǎng)殖期間

69、水溫25~29.0 ℃，pH 7.0~7.5，溶氧≥6.0 mg /L。</p><p>　　1.3 取樣及粗酶液的制備</p><p>　　試驗(yàn)結(jié)束后，停食24 h，分別在各試驗(yàn)組中隨機(jī)取20尾大鱗副泥鰍，用50 mg/L的MS-222 溶液麻醉，解剖并取分離出其肝胰臟，參照葉元土等[10]的方法制備肝胰臟粗酶液。先用預(yù)冷的去離子水沖洗干凈，再用濾紙吸去表面水分，在電子天平上準(zhǔn)確稱重，

70、然后按重量體積比為1：9加入預(yù)冷的生理鹽水，再用玻璃勻漿器勻漿（在冰盤上低溫操作）再以4000 r/m離心10 min，取上清液測(cè)定酶活性(如有未能及時(shí)測(cè)定的樣品應(yīng)及時(shí)放入冰箱4 ℃保存) 。</p><p><b>　　1.4 指標(biāo)測(cè)定</b></p><p>　　肝胰臟谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

71、GOT和GPT的活性單位定義為每毫克組織蛋白與基質(zhì)在37 ℃下作用60 min，生成1 μmol丙酮酸所需要的酶。</p><p>　　1.5 數(shù)據(jù)處理方法</p><p>　　試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用采用Spss 19.0統(tǒng)計(jì)軟件中One-way ANOVA進(jìn)行方差分析，若組間差異顯著，再用Duncan氏進(jìn)行多重比較，差異顯著水平為P＜0.05。<

72、/p><p><b>　　2 結(jié)果與分析</b></p><p>　　由表2可知，飼料脂肪水平對(duì)大鱗副泥鰍轉(zhuǎn)氨酶活性的影響較顯著。隨著飼料脂肪水平的升高，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）均呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，且均在飼料脂肪含量為6.48%的試驗(yàn)組達(dá)到最大，分別為38.22 U/mg和30.22 U/mg；GPT顯著高于其余各試驗(yàn)組（P ＜ 0.05），G

73、OT除與飼料脂肪含量為4.49%的試驗(yàn)組差異不顯著外（P ＞ 0.05），顯著高于其余各試驗(yàn)組（P ＜ 0.05）。以二次曲線來擬合飼料脂肪含量與GPT、GOT的關(guān)系（見圖1~2）。通過回歸可知，GPT的回歸方程為：Y = -0.3815X2 + 4.5582X + 19.575（R² = 0.7737），則GPT的最大時(shí)脂肪水平為5.97%；GOT的回歸方程為：Y =-0.3311X2 + 3.3889X + 20.147(

74、R² = 0.8801)，則GOT最大時(shí)脂肪水平為5.12%。</p><p>　　表2飼料脂肪水平對(duì)大鱗副泥鰍轉(zhuǎn)氨酶活性的影響（U/mg） n=3</p><p>　　Tab.2 Effects of dietary lipid levels on transaminase of Paramisgurnus dabryanus n=3</p><

75、p>　　圖1 飼料脂肪水平與谷丙轉(zhuǎn)氨酶的關(guān)系 圖2 飼料脂肪水平與谷草轉(zhuǎn)氨酶的關(guān)系</p><p>　　Fig. 1 Relationship between glutamic propylic Fig. 2 Relationship between glutamic oxaolacetic transaminase and dietary lipid levels transaminase

76、and dietary lipid levels</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　轉(zhuǎn)氨酶（aminotransferase）廣泛存在于生物機(jī)體內(nèi)，它們的作用是催化α-氨基酸的α-氨基與α酮基互換，這是機(jī)體內(nèi)中間代謝的重要酶反應(yīng)。轉(zhuǎn)氨酶的種類很多，其中以谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)的活力最強(qiáng)，也最為重要。同時(shí)，GPT和GO

77、T也是肝細(xì)胞受損最靈敏指標(biāo)之一，即使非常小的劑量，也會(huì)對(duì)肝功能造成損傷[11]。因此，血清GOT和GPT活力的增減可以反映機(jī)體中毒或病理變化。GPT絕大部分位于細(xì)胞漿，是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉(zhuǎn)氨作用，GOT主要位于線粒體，少部分位于細(xì)胞漿，是催化谷氨酸與草酰乙酸之間的轉(zhuǎn)氨作用。當(dāng)肝細(xì)胞膜受損導(dǎo)致其通透性增加時(shí)，細(xì)胞漿內(nèi)的GPT首先釋放到血液中;當(dāng)線粒體膜受到損傷后，GOT也會(huì)隨之釋放到血液中。因此，血漿中2種酶活性的變化也是不同的，

78、GOT的釋放遲于GPT，但是血漿中GOT活性的變化和GPT是同步的，均可指示肝細(xì)胞損傷[12]。</p><p>　　本試驗(yàn)中，當(dāng)飼料脂肪低于8.47%時(shí)，GPT和GOT隨著飼料脂肪水平的升高，呈逐漸升高的變化趨勢(shì)。適宜脂肪可發(fā)揮脂肪對(duì)蛋白質(zhì)的節(jié)約作用，減少了作為能量消耗掉的蛋白質(zhì)含量，使更多的外源蛋白通過轉(zhuǎn)氨酶的轉(zhuǎn)氨作用在體內(nèi)得以沉積[13]，促使轉(zhuǎn)氨酶活性的升高。章龍珍[14]對(duì)點(diǎn)籃子魚(Siganus gu

79、ttatus)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料脂肪水平低于10.68%時(shí)，其血清GPT和GOT活性隨著飼料脂肪水平的升高呈逐漸降低的變化趨勢(shì)，肝胰臟GPT和GOT活性隨著飼料脂肪水平的升高呈逐漸升高的變化趨勢(shì)。與本研究結(jié)果一致。張春暖等[15]對(duì)梭魚（Mugil so-iuy Basilewsky）、王朝明等[16]對(duì)胭脂魚(Myxocyprinus asiaticus)、竇兵帥[17]對(duì)鱸魚(Lateolabrax japonicus)的研究均發(fā)現(xiàn)適

80、宜的飼料脂肪可提高魚類肝胰臟GPT和GOT活性。但石桂城[18]對(duì)吉富羅非魚(GIFT，Oreochromis niloticus)研究發(fā)現(xiàn)，飼料油脂添加水平從0到12%，其肝胰臟GPT和GOT活性呈逐漸降低的變化趨勢(shì)，與本研究結(jié)果相悖?？赡苁且?yàn)轸~的品種、生長(zhǎng)</p><p>　　當(dāng)飼料脂肪高于8.47%時(shí)，隨著飼料脂肪水平的升高，大鱗副泥鰍GPT和GOT活性顯著降低。飼料中脂肪水平超過需求量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致魚體的脂

81、肪沉積增加，會(huì)導(dǎo)致大量脂肪在魚肝細(xì)胞內(nèi)堆積，導(dǎo)致肝細(xì)胞體積變大，細(xì)胞膜通透性增大，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起肝細(xì)胞變性、壞死，產(chǎn)生脂肪肝[19]。致使肝細(xì)胞內(nèi)大量的GPT和GOT滲透進(jìn)入血清，導(dǎo)致肝胰臟內(nèi)GPT和GOT活性降低，血清內(nèi)GPT和GOT活性升高。章龍珍[14]對(duì)點(diǎn)籃子魚研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料脂肪水平高于10.68%時(shí)，其肝胰臟GPT和GOT活性隨著飼料脂肪水平的升高呈逐漸降低的變化趨勢(shì)。向梟等[20]對(duì)白甲魚(Onychostoma simus

82、)、趙巧娥等[21]對(duì)鳡（Elopichthys bambusa）、林仕梅等[22]對(duì)羅非魚(Oreochromis spp)和蔣步國(guó)[23]對(duì)美國(guó)紅魚(Sciaenops ocellatus)的研究均發(fā)現(xiàn)，隨著飼料脂肪水平的升高，其肝胰臟GPT和GOT活性逐漸降低，血清GPT和GOT活性逐漸升高。本研究進(jìn)一步驗(yàn)證了以上觀點(diǎn)，說明飼料脂肪過高，會(huì)引起魚類肝臟發(fā)生病變，甚至產(chǎn)生脂肪肝。</p><p><b&

83、gt;　　4 小結(jié)</b></p><p>　　適宜的飼料脂肪水平能顯著影響大鱗副泥鰍肝胰臟轉(zhuǎn)氨酶的活性，但飼料脂肪水平過高時(shí)，其肝胰臟轉(zhuǎn)氨酶活性顯著降低。通過二次方程回歸可知，當(dāng)飼料脂肪水平為5.12%-5.97%時(shí)，其肝胰臟轉(zhuǎn)氨酶活性最大。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] Halver

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93、ransmontanus)[ J] .Aquaculture, 1989, 78:183-194</p><p>　　[20] 向梟,周興華,陳建,等.飼料脂肪水平對(duì)白甲魚幼魚形體指數(shù)、脂肪沉積和脂肪代謝酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2013,09:1349-1358.</p><p>　　[21] 趙巧娥,朱邦科,沈凡,等. 飼料脂肪水平對(duì)鳡幼魚生長(zhǎng)、體成分及血清生化指標(biāo)的影響[J].華

94、中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,03:357-363.</p><p>　　[22] 林仕梅,羅莉.飼料脂肪水平和復(fù)合降脂因子對(duì)羅非魚生長(zhǎng)性能和肝胰臟代謝、抗氧化指標(biāo)的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2010,06:1585-1591.</p><p>　　[23] 蔣步國(guó).飼料中不同蛋白質(zhì)和脂肪水平對(duì)美國(guó)紅魚脂肪肝病的研究[J].科學(xué)養(yǎng)魚，2012，12:68-69.</p><

95、p><b>　　致謝:</b></p><p>　　在論文完成之際，我要特別感謝我的指導(dǎo)老師向梟老師，感謝他在百忙之中，抽出寶貴時(shí)間幫助我們完成試驗(yàn)和論文，感謝他給予我們的悉心指導(dǎo)和熱情關(guān)懷。無論開題、試驗(yàn)過程還是論文的撰寫，一直都有老師的指導(dǎo)，使得試驗(yàn)和論文能夠順利完成。在此，我代表我課題組向向老師表示誠(chéng)摯的感謝！</p><p>　　本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）指導(dǎo)