催乳素和t-PA乳腺共表達(dá)載體構(gòu)建和細(xì)胞表達(dá)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究從關(guān)中奶山羊中克隆得到催乳素基因，并以已有的人t-PA乳腺特異性表達(dá)載體pEBT為基礎(chǔ)，成功的構(gòu)建了催乳素和t-PA基因乳腺共表達(dá)載體pPT。轉(zhuǎn)染鼠乳腺癌細(xì)胞EMT6，篩選獲得陽性表達(dá)株。本實驗驗證了催乳素對提高外源蛋白的表達(dá)有促進作用并為利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)牛乳腺生物反應(yīng)器，提供了高效的乳腺表達(dá)載體，對于提高乳腺生物反應(yīng)器中外源蛋白表達(dá)量的研究進行了新的探索。相關(guān)研究結(jié)果如下： 1.通過RT-PCR技術(shù)成功的從關(guān)中奶

2、山羊中克隆得到長度為760bp催乳素cDNA基因，其中包含完整的編碼序列。序列分析表明，片段與GenBank中登錄的羊PRLcDNA序列的同源性為99％，且突變不影響蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。 2.利用定向克隆的方法將PRLcDNA基因克隆至已有的人t-PA乳腺特異性表達(dá)載體pEBT，構(gòu)建成催乳素和t-PA基因乳腺共表達(dá)載體pPT。載體含有抗性基因和綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因，并報告基因和目的基因表達(dá)為融合型表達(dá)。 3.通

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