應(yīng)激影響肉仔雞脂肪沉積的分子生物學(xué)機(jī)制.pdf

1、本研究利用外源糖皮質(zhì)激素(地賽米松，DEX)導(dǎo)入的方法建立肉仔雞的應(yīng)激模型，從肉仔雞的生長前期和后期兩個階段探討應(yīng)激對肉仔雞脂肪代謝的影響。通過研究應(yīng)激對肉仔雞脂肪沉積規(guī)律影響的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)考察了應(yīng)激對肝臟脂肪從頭合成的影響機(jī)制。 應(yīng)激對肉仔雞生長前期脂肪代謝的影響選取7日齡體重相近的Arbor Acres雄性肉雞108只，隨機(jī)分為三個處理：應(yīng)激組(DEX)、對照組(Control)和采食量配對組(Pair-fed)。應(yīng)激組每天

2、早8：00腹部皮下注射地塞米松(1mg/ml)，劑量為2.0mg/Kg體重，自由采食和飲水；對照組注射與應(yīng)激組相同體積的生理鹽水，自由采食和飲水；采食量配對組注射與應(yīng)激組相同體積的生理鹽水，同時飼喂應(yīng)激組前一天的采食量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激顯著降低了14日齡肉仔雞的平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化率，增加了頸脂、腹脂、腿脂以及肝臟的脂肪沉積；應(yīng)激顯著增加了血漿中胰島素水平，VLDL(極低級密度脂蛋白)也有增加的趨勢，這表明血液中脂類的流量增加；應(yīng)激還提高

3、肝FAS(脂肪酸合成酶)以及ME(蘋果酸酶)的活性，促進(jìn)肝臟ACC(乙酰輔酶A羧化酶)、FAS以及ME mRNA的表達(dá)。但頸脂和腹脂中LPL(脂蛋白脂酶)、PPARγ(過氧化物酶體增殖物激活受體)以及ATGL(脂肪細(xì)胞甘油三酯酶)mRNA的水平?jīng)]有受到應(yīng)激的影響。這表明，應(yīng)激導(dǎo)致脂肪沉積增加的主要原因是肝臟脂肪酸從頭合成的增強(qiáng)以及血漿中脂類流量的增加。 應(yīng)激對肉仔雞生長后期脂肪代謝的影響選取35日齡體重相近的Arbor Acre

4、s雄性肉仔雞196只，隨機(jī)分為三個處理：應(yīng)激組(DEX，劑量為2.0mg/Kg體重)、對照組(Control)和采食量配對組(Pair-fed)，自由采食、飲水。注射3d后，于38日齡分別隨機(jī)選取8只雞于飼喂和空腹?fàn)顟B(tài)下采集血液、腹脂、皮下脂肪(腿部、頸部皮下)和肝臟樣品。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DEE處理極顯著增加肝臟和頸脂的相對重量，DEX處理有增加腹脂和腿脂相對重量的趨勢；在禁食狀態(tài)下，DEX處理顯著增加血漿中TG(甘油三酯)、VLDL、尿酸和

5、胰島素的含量，使肝素后血漿中LPL活性升高；在飼喂?fàn)顟B(tài)下，DEE處理顯著增加血糖、TG、VLDL、尿酸和胰島素含量：DEX處理顯著增加38日齡肉仔雞在禁食狀態(tài)下ME的活性，肝臟FAS的活性也有增加的趨勢，但DEX對飼喂?fàn)顟B(tài)下肝臟FAS和ME的活性沒有影響。DEX處理極顯著地增加38日齡肝臟禁食狀態(tài)下ACC和FAS的mRNA水平，與配對組相比，DKX處理也有增加ME的mRNA表達(dá)量的趨勢，在飼喂?fàn)顟B(tài)下，與配對組相比，DEX處理顯著增加肝臟

6、ACC和ME mRNA的水平；與配對組相比，DEX處理促進(jìn)禁食狀態(tài)下腹脂F(xiàn)AS的mRNA水平，但對禁食狀態(tài)下腹脂ME的mRNA水平以及飼喂?fàn)顟B(tài)下FAS、ME的mRNA水平都沒有顯著影響：DEX處理顯著增加飼喂?fàn)顟B(tài)下腹脂LPL mRNA的水平，在禁食狀態(tài)下，LPL mRNA也有增加的趨勢，而腹脂ATGL和PPARγ不論是禁食還是飼喂?fàn)顟B(tài)都沒有受到DEX處理的影響。這表明，肝臟脂肪酸從頭合成能力增加以及血漿中脂肪流量增多是38日齡應(yīng)激肉仔雞

7、脂肪沉積增加的主要原因，這與應(yīng)激對肉仔雞生長前期的影響也是一致的：血漿LPL活性增加以及腹脂LPL mRNA表達(dá)量的上調(diào)是應(yīng)激肉仔雞脂肪沉積增加的另一個原因，這一點(diǎn)與應(yīng)激對肉仔雞生長前期的影響不同，這可能與生長后期腹脂明顯增多有關(guān)系。 DEX和胰島素對離體培養(yǎng)的肉仔雞肝細(xì)胞脂肪酸合成的影響分離并培養(yǎng)6日齡肉仔雞肝細(xì)胞，培養(yǎng)15h后開始正式試驗(yàn)，分為4個處理，每個處理6個重復(fù)。對照組：基礎(chǔ)培養(yǎng)液，為含5％新生牛血清的Willia

8、ms’E培養(yǎng)基；DEX組：基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含DEX200nmol/L；INS組：基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含胰島素100nmol/L；DEX+INS組：在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含DEX200nmol/L、胰島素100nmol/L。在CO2培養(yǎng)箱中37℃靜置培養(yǎng)24h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DEX和胰島素共同作用于肝細(xì)胞時，能顯著增加其FAS、ME以及ACC mRNA的表達(dá)量，而DEX或胰島素單獨(dú)處理沒有改變FAS、ME以及ACC mRNA的表達(dá)量。DEX或胰島素單獨(dú)處理沒有改

9、變?nèi)庾须u肝細(xì)胞LXRa和SREBP-1c mRNA的水平，但DEX和胰島素共同作用于肝細(xì)胞時，LXR(P=0.0036)的mRNA的水平顯著增加了，對于SREBP-1c mRNlA的水平，兩種激素共同作用與對照組或DEX組相比有增加的趨勢(P=0.0719)，而與胰島素處理相比沒有顯著差別。這表明，是DEX和胰島素的協(xié)同作用促進(jìn)了肝臟脂肪酸的從頭合成，這與活體試驗(yàn)即DEX處理以及由此導(dǎo)致的高胰島素血癥促進(jìn)了肝臟脂肪酸合成的結(jié)果是一致的。