水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留的UPLC-MS-MS分析方法及恩諾沙星藥物代謝研究.pdf

1、喹諾酮類藥物是發(fā)展迅速且應(yīng)用廣泛的廣譜抗菌藥物。此類藥物的組織藥物濃度高，且分布廣泛，故成為水產(chǎn)養(yǎng)殖中重要的抗感染藥物之一。長期以來，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中使用的喹諾酮類藥物品種混亂，且出現(xiàn)反復(fù)、超量使用的情況。而該類藥物的殘留可對人、畜、魚產(chǎn)生副作用，具有致畸、致癌作用。因此，制定一套快速、有效的水產(chǎn)品中喹諾酮藥物殘留檢測方法，研究該類藥物中普遍使用的藥物——恩諾沙星，在鯽魚不同健康狀況下的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)，同時(shí)研究恩諾沙星對鯽魚肝臟脂肪酸組成

2、的影響，對監(jiān)控水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中該類藥物的安全使用意義重大。
　　 本研究分為三個(gè)部分，第一部分為利用UPLC-MS/MS技術(shù)建立一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中20種喹諾酮類藥物殘留的分析方法；第二部分研究健康和非健康鯽魚口灌恩諾沙星后的藥代動(dòng)力學(xué)變化，分析不同健康狀況下該藥物在血液和肝臟中的吸收、分布和代謝的差異。第三部分為以口灌恩諾沙星的鯽魚肝臟作為研究對象，從脂肪酸組成的變化角度來研究恩諾沙星對鯽魚肝臟可能產(chǎn)生的不良影響。
　　

3、本研究的第一部分利用UPLC-MS/MS技術(shù)建立一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留的分析方法。對樣品前處理（提取液、提取方式和凈化方法）及分離條件進(jìn)行優(yōu)化，樣品經(jīng)檸檬酸磷酸鹽緩沖液(Mcllvaine)超聲提取，采用固相萃取(SPE)方法凈化提取液，并對目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行富集，建立了同時(shí)檢測水產(chǎn)品中20種喹諾酮類藥物的UPLC-MS/MS分析方法。該方法對色譜柱、流動(dòng)相體系、色譜和質(zhì)譜相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了選擇優(yōu)化。結(jié)果表明：依諾沙星、奧索利酸、培

4、氟沙星、帕珠沙星、氟羅沙星含量在3～300μg/kg范圍，萘啶酸、氟甲喹含量在0.5～50μg/kg范圍，其余13種喹諾酮類化合物含量在1～100μg/kg范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.9981～0.9999，定量限(LOQ)0.34～8.13μg/kg。藥物含量在5～150μg/kg范圍，除氟甲喹、萘啶酸外，其它喹諾酮的回收率均在63.6％～92.8％之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.51％～11.32％。該方法靈敏度高，定性定量準(zhǔn)確，

5、分析速度快，可滿足水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物多殘留檢測的要求。
　　 第二部分對口灌恩諾沙星后的健康和非健康鯽魚的比較藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究，全面比較了不同健康狀況下恩諾沙星在血液和肝臟中的吸收、分布和代謝的差異。結(jié)果表明：本研究條件下，口灌給藥后恩諾沙星在健康和非健康鯽魚血液中均符合一級吸收二室模型。健康組分布半衰期(t1/2ka=0.42h)高于非健康組(t1/2ka=1.11h)，而消除半衰期(t1/2β=7.18h)低于非健康組(

6、t1/2β=18.93h)，曲線下面積(AUC=22.85μg/mL·h)高于非健康組(AUC=18.21μg/mL·h)，平均殘留時(shí)間(MRT=10.53h)低于非健康組(MRT=20.89h)?？诠嘟o藥后恩諾沙星在兩組鯽魚肝臟中也均符合一級吸收二室模型，其中健康組和非健康組的吸收半衰期(t1/2ka)分別為0.47h和1.27h，消除半衰期(t1/2β)分別為23.71h和25.66h，總曲線下面積(AUC)分別為85.77μg/m

7、L·h和26.13μg/mL·h；平均殘留時(shí)間(MRT)則分別為10.53h和20.88h。通過藥代動(dòng)力學(xué)研究，與健康組鯽魚比較，非健康組鯽魚的吸收、分布和消除都因?yàn)樵馐懿【趾Χ艿接绊懀_(dá)到峰值后1～1.5h恩諾沙星在非健康鯽魚的血液和肝臟濃度的降幅分別為67.16％和52.31％，表現(xiàn)出“首過效應(yīng)”。比照恩諾沙星的最高殘留限量規(guī)定，對微發(fā)病或已發(fā)病魚體使用恩諾沙星進(jìn)行治療則需要10d以上的休藥期。
　　 第三部分以口灌恩諾

8、沙星的鯽魚肝臟作為研究對象，從脂肪酸組成的變化角度來研究恩諾沙星對鯽魚肝臟可能存在的不良影響。本研究提取口灌恩諾沙星后的鯽魚肝臟的總脂質(zhì)，采用薄層色譜對總脂質(zhì)進(jìn)行制備分離，利用氣相色譜分析各組分的脂肪酸組成的變化。結(jié)果表明：口灌藥物后，肝臟脂肪酸中的飽和脂肪酸含量水平增加明顯，多不飽和脂肪酸含量水平下降，根據(jù)臨床研究的飽和脂肪酸含量上升可導(dǎo)致胰島素敏感性降低的報(bào)道，預(yù)示恩諾沙星有抑制胰島素敏感性的可能性。總脂質(zhì)脂肪酸組成中的C20:4-