肽結(jié)合與游離氨基酸比例對(duì)離體乳腺組織酪蛋白合成的影響.pdf

1、研究證實(shí)，血液中的小肽可以作為乳蛋白合成的前體，參與乳腺酪蛋白的合成。但是，酪蛋白表達(dá)最高水平時(shí)小肽與游離氨基酸的比例仍存在爭(zhēng)議。研究得出酪蛋白中2％-16％的苯丙氨酸、12％-19％的賴氨酸和約17％的蛋氨酸來自于血液中的小肽，而亮氨酸和纈氨酸基本不由小肽供應(yīng)。小肽與游離氨基酸可以以不同的載體被轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入乳腺組織利用，小肽在PepT2的作用下，被完整的轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入乳腺組織，游離氨基酸通過氨基酸載體被轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入乳腺組織，某些不同的氨基酸可以利用

2、相同的載體進(jìn)入細(xì)胞，這些氨基酸之間存在相互競(jìng)爭(zhēng)的關(guān)系，因此，小肽的添加可以緩解游離氨基酸通道的競(jìng)爭(zhēng)作用，使乳腺組織獲得更多的氨基酸。
　　 本研究采用體外乳腺組織外植體培養(yǎng)方法，研究在胞外環(huán)境中含有全部必須氨基酸條件下，Met-Met/Arg-His-Ile分別以不同比例(0％、5％、10％、15％、20％、40％、60％、80％、100％)替代游離氨基酸，對(duì)乳蛋白合成的影響及肽轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制。共有9個(gè)處理組，每個(gè)處理用三頭牛重復(fù)。

3、正常培養(yǎng)基處理體外培養(yǎng)的乳腺組織外植體48h，用不含有氨基酸的培養(yǎng)基饑餓外植體24h，再用處理培養(yǎng)基培養(yǎng)外植體48h，培養(yǎng)完畢后利用RT-PCR和Western-Blot測(cè)定酪蛋白、氨肽酶、PepT2的mRNA和蛋白水平表達(dá)。確定酪蛋白表達(dá)水平最高時(shí)，小肽(Met-Met/Arg-His-Ile)與游離氨基酸的最佳比例。
　　 本研究結(jié)果：(1)Met-Met顯著促進(jìn)了體外培養(yǎng)的乳腺組織中酪蛋白的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)(P<0.05

4、)，但是，Arg-His-Ile雖然有提高體外培養(yǎng)的乳腺組織中酪蛋白的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)的趨勢(shì)，但是差異不顯著(P>0.05)。(2)游離蛋氨酸：Met-Met=80-85：20-15，酪蛋白表達(dá)出現(xiàn)高峰，再增加Met-Met的比例，酪蛋白的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)出現(xiàn)下降趨勢(shì)。(3)Met-Met/Arg-His-Ile促進(jìn)了體外培養(yǎng)的乳腺組織中肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體2(P<0.05)的表達(dá)。表明(1)Met-Met可以作為酪蛋白合成的前體被乳腺組織利