梔子組織和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)及其多糖的分離純化和生物學(xué)活性的研究.pdf

1、多糖是生物化學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)重要課題,并正在成為新的研究熱點(diǎn).到目前為止,已有很多關(guān)于植物多糖,特別是中草藥多糖的報(bào)道.人們發(fā)現(xiàn)多糖具有提高免疫能力,抗病毒,抗菌,抗氧化等多種生物學(xué)活性.該論文研究了梔子多糖的分離純化及部分生物學(xué)活性,并探討了通過(guò)生物技術(shù)生產(chǎn)梔子多糖的可行性.梔子是傳統(tǒng)中藥,其多糖在抑制腫瘤生長(zhǎng)和抗氧化過(guò)程中起重要作用.100ug/ml的梔子多糖在體外可以抑制S-180肉瘤細(xì)胞(58﹪)、Hca-f腹水肝癌細(xì)胞(51﹪)

2、、K562人紅白血病細(xì)胞(63﹪).梔子多糖在活體中對(duì)Hca-f肝癌實(shí)體瘤的抑制率為49﹪,口服給藥的效果好于注射給藥.在利用懸浮細(xì)胞生產(chǎn)梔子多糖的研究中,通過(guò)選擇梔子多糖的高產(chǎn)細(xì)胞株系以及改變培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件來(lái)增加細(xì)胞的生長(zhǎng)和多糖的百分含量.盡管梔子懸浮細(xì)胞培養(yǎng)有許多富于個(gè)性的特點(diǎn),但是有一個(gè)總的規(guī)律,即利于細(xì)胞生長(zhǎng)的條件很可能不利于梔子多糖的合成和積累.梔子多糖一般在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的初期形成,梔子黃色素則最早在培養(yǎng)的第12天開(kāi)始合成,

3、因此通過(guò)培養(yǎng)條件的調(diào)整以及收獲時(shí)間的改變,能有效地排除梔子黃色素對(duì)梔子多糖分離提取的干擾,即通過(guò)改變培養(yǎng)條件抑制梔子黃色素的合成,并在梔子黃色素產(chǎn)生之前收獲細(xì)胞,提取梔子多糖.我們采用了正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確立了梔子多糖的提取和Savage法除蛋白的條件,結(jié)果發(fā)現(xiàn),用50倍體積的堿水在80℃下提取2小時(shí),再經(jīng)過(guò)一系列醇析、脫色和脫蛋白等處理,梔子果實(shí)多糖的得率為1.74﹪,是文獻(xiàn)報(bào)道的3倍.DEAE纖維素柱層析可以將梔子多糖分成分子量分別為14