膠質(zhì)瘤干細胞CXCR4活化后細胞信號通路檢測及生物學效應(yīng)初步研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文膠質(zhì)瘤干細胞CXCR4活化后細胞信號通路檢測及生物學效應(yīng)初步研究姓名：姜建勇申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：卞修武20090501第二軍醫(yī)人學碩士學位論文瘤的血管生成(9)。而在不同的前列腺癌細胞系cXCLl2／CXcR4軸激活后分別通過其下游P13K／Akt通路和MAPK／ERK通路促進分泌不同的血管生成因子(IO)。與此同時，在不同的細胞P13科Akt通路和MAPl淝RK通路激活有的是通過

2、其中的一條通路促進細胞的遷移侵襲(1114)，有的則是兩條通路共同參與該過程(15)。因此，研究何種通路在CXCR4介導的GSCs促侵襲和血管生成作用發(fā)揮效應(yīng)至關(guān)重要。本研究中，我們利用本課題組前期已建立的條件培養(yǎng)基篩選法(16)，從U87細胞系中獲得膠質(zhì)瘤細胞球，并運用免疫熒光染色檢測其神經(jīng)干細胞標記物CDl33和nestin的表達。利用Westem—Blot技術(shù)檢測了CXCR4活化后，GSCs中P13耐Akt和MAPⅪERK通路的激

3、活情況；運用ELISA法檢測不同處理條件下GsCs培養(yǎng)上清中VEGF的分泌量；利用Transwell小室檢測了不同處理條件下GSCs遷移和侵襲能力。主要結(jié)果和結(jié)論如下：1CXCLl2刺激GSCs可引起P13臥～kt通路和MAPl洫RK通路活化。免疫熒光染色顯示，運用條件培養(yǎng)基篩選的膠質(zhì)瘤細胞球表達神經(jīng)干細胞標記物CDl33和nestin。采用lOOn∥mlcxcLl2刺激后5min可以檢測p—Akt和pERKl，2增加，在30Illin

4、時達到最高點。CxcR4特異性抑制劑AMD3100可抑制CXCLl2對p—Akt和p—ERKl／2的誘導作用，此效應(yīng)呈濃度依賴性。CxcLl2和AMD3100處理均不影響總Akt和ERKl／2水平。上述研究結(jié)果表明CXCLl2與CXCR4結(jié)合可激活其下游的P13UAkt和MAPl(／ERK信號通路。2CXCLl刀CxCR4軸激活下游P13K，Akt和MAPK／ERK信號通路之間之間無交互作用。P13K特異性抑制劑LY294002預處理G

5、SCs可有效阻斷P13UAkt信號通路的激活而不影響pERKl，2水平；而MEK特異性的抑制劑PD98059預處理GSCs可以有效阻斷MAPl淝RK信號通路而對pAkt水平無明顯影響。上述研究表明CXCR4激活下游的P13搿Akt和MAPl／ERK信號通路之間之間無交互作用。3CXCR4活化通過激活P13K／Akt信號通路而促進GSCs遷移與侵襲。我們分別運用Transwell小室和包被Matrigel的Transwell小室檢測CXC

6、Ll2／CxCR4軸激活對GsCs遷移與侵襲，結(jié)果顯示CXCLl2以濃度依賴的方式誘導GSCs的遷移，其中在100ng／m1CXCLl2GSCs遷移能力最強。AMD3100處理組、LY294002處理組明顯抑制CXCLl2刺激GSCs的遷移與侵襲，而PD98059處理組不抑制該效應(yīng)，表明CXCLl2／CXCR4軸激活其下游P13列Akt信號通路參與促進GSCs的遷移與侵襲。4CXCR4活化通過激活P13ⅪA“信號通路而促進GSCs分泌V