克拉羅酚的臨床前藥代動(dòng)力學(xué)及體內(nèi)代謝的研究.pdf

1、克拉羅酚(KLLF)為首次合成的卟啉類新化合物，藥理實(shí)驗(yàn)證明其具有良好的抗氧化作用，擬申報(bào)一類新藥。本文研究工作旨在對(duì)其臨床前藥代動(dòng)力學(xué)及代謝做一系統(tǒng)評(píng)價(jià)，為該藥臨床研究及劑型開發(fā)提供依據(jù)。 1、生物樣本中克拉羅酚分析方法的建立建立了簡(jiǎn)便、靈敏、專屬性強(qiáng)的LC/MS/MS法，測(cè)定大鼠生物樣本中克拉羅酚的濃度；生物樣本以乙腈沉淀蛋白后直接檢測(cè)。色譜分析采用Inertsil ODS-3色譜柱(3μm，2.1×150 mmID，日本G

2、L．science公司)；以甲醇、乙腈、水、乙酸胺及甲酸為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0.4 mL/min；柱溫30℃，進(jìn)樣量40μL，通過電噴霧離子化四極桿串聯(lián)質(zhì)譜，以多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)(MRM)方式進(jìn)行檢測(cè)；用于定量分析的離子對(duì)為m/z964→906；生物樣本的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定。經(jīng)方法學(xué)確證，克拉羅酚的線性范圍為5～2560ng．mL<'-1>，定量下限為5ng.mL<'-1>，該方法的日內(nèi)、日間精密度(RSD)均小于7﹪，方法準(zhǔn)

3、確度在93～107﹪之間。結(jié)果表明，所建立的方法適用于大鼠體內(nèi)克拉羅酚的藥代動(dòng)力學(xué)研究。 2、克拉羅酚在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)大鼠單次尾靜脈注射克拉羅酚(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)后于不同時(shí)間點(diǎn)取血，用上述建立的LC/MS/MS方法測(cè)定血漿中克拉羅酚的濃度，根據(jù)其血藥濃度．時(shí)間曲線，采用DSA 2.1非房室模型法推算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明，大鼠給藥后3個(gè)劑量組C<,max>UC<,0-72h>UC<,0-∞>

4、與給藥劑量呈線性相關(guān)(r>0.969，p<0.05)。藥物大鼠體內(nèi)消除半衰期較長(zhǎng)，個(gè)體差異較大，且其消除半衰期與劑量之間呈正相關(guān)(p<0.001)，相關(guān)系數(shù)為0.818。 3、克拉羅酚在大鼠體內(nèi)的組織分布研究大鼠靜注克拉羅酚15mg/kg后，于給藥后0.5h，3h，6h，12h，24h斷頭處死，立即取出各臟器組織，生理鹽水沖凈表面血液及內(nèi)容物，濾紙吸干，稱重后用乙腈制成勻漿，用LC/MS/MS法測(cè)定各組織藥物濃度。結(jié)果，在各組織

5、中均未檢測(cè)到克拉羅酚原型藥物，卻檢測(cè)到了其主要代謝產(chǎn)物克拉羅酚-A，并由此建立了克拉羅酚-A的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)克拉羅酚-A進(jìn)行定量分析。結(jié)果顯示，克拉羅酚-A在給藥后0.5h即可在各組織中被檢出，且24h后主要臟器中仍有大量克拉羅酚-A存在，有蓄積可能。脾臟、腦、睪丸、胃和脂肪等組織在各時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果均較低；克拉羅酚-A主要集中在肺、肝、脾、腎等血流灌注高的組織，腦組織中含量最低，說明該藥不易通過血腦屏障。 4、克拉羅酚-A在大鼠

6、體內(nèi)的排泄研究大鼠靜注克拉羅酚15mg/kg后，收集膽汁、尿液、糞便樣品，記錄體積和重量，用LC/MS/MS方法分析樣品中克拉羅酚的濃度。將尿液、膽汁及糞便中的藥物濃度乘以相應(yīng)的排泄量，并累積求和，計(jì)算藥物的累積排泄量。結(jié)果顯示大鼠單次尾靜脈注射給藥后，從膽汁和尿液中排泄的原型藥物量分別占總給藥量的0.02767﹪和0.0275﹪，糞便中的藥物累積排泄2<0.01﹪。 5、克拉羅酚的血漿蛋白結(jié)合率研究血漿中加入克拉羅酚使其最終血

7、漿藥物濃度為0.2、1、2μg/mL，樣品用平衡透析法在4℃條件下透析72h，透析結(jié)束后，用LC/MS/MS法分別測(cè)定血漿及緩沖液中的藥物濃度，計(jì)算藥物的血漿蛋白結(jié)合率，結(jié)果表明在上述范圍內(nèi)克拉羅酚與人血漿蛋白結(jié)合率分別為99.73﹪，98.49﹪，97.50﹪，其血漿蛋白結(jié)合率有濃度依賴性(r=0.98，p<0.01)。 6、克拉羅酚在大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物的初步推測(cè)采用HPLC/DAD和LC/MS/MS的方法對(duì)大鼠膽汁、尿液和組織