創(chuàng)新藥物GP205的體內分析及臨床前藥代動力學研究.pdf

1、本課題主要對創(chuàng)新藥物GP205進行臨床前藥物代謝動力學研究，計算相關的臨床前藥代動力學參數，考察給藥劑量與相關藥動學參數的相關性特征，確定口服藥物GP205后體內吸收的絕對生物利用度，檢驗多劑量給藥后藥物的累積效應。
　　 一、生物樣品中GP205定量分析方法的建立
　　 本研究建立了靈敏、可靠的液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)方法測定生物樣品（Beagle犬、SD大鼠血漿）中創(chuàng)新藥物GP205的濃度并且研究了GP

2、205的體內藥代動力學行為。選用紫杉醇作為內標，樣品前處理采用甲基叔丁基醚進行液液萃取。色譜柱選用Agilent ZORBAX SB-C18(3mm×100mm，3.5μm);流動相為甲醇-含0.1％甲酸的水溶液(95∶5，v/v)進行等度洗脫，流速0.3ml/min，進樣量10μl，分析時間5min。采用ESI離子源、正離子掃描模式，掃描方式為選擇反應監(jiān)測(selected reaction monitor，SRM);用于定量的離子通

3、道分別為m/z887→787(GP205)和m/z876→307.80（內標，紫杉醇），碰撞能量分別為35V和21.5V。
　　 本研究，建立的Beagle犬血漿樣品分析方法的線性范圍為1.996～4990.00ng/ml，SD大鼠血漿樣品分析方法的線性范圍為1.990～4975.00ng/ml，最低定量下限為2ng/ml;批內、批間精密度（RSD）均小于15％;生物樣品經液液萃取前處理后的提取回收率大于80％;基質效應的考察結

4、果為90％～100％，可以確定生物基質不影響藥物濃度的測定;GP205和內標紫杉醇標準貯備液在-20℃冰箱放置40天穩(wěn)定，血漿樣品室溫下放置2小時后提取、樣品處理后自動進樣器放置12小時、凍融三次以及-80℃低溫冰箱放置40天后提取均穩(wěn)定，不影響生物樣品的正常測定。
　　 二、GP205在Beagle犬體內單劑量給藥的藥物代謝動力學研究
　　 試驗采用24條健康、成年Beagle犬，分成4組，雌雄各半，分別口服給藥低劑量

5、0.75mg/kg、中劑量1.5mg/kg、高劑量3mg/kg，靜注給藥0.5mg/kg，于給藥前及給藥后不同時間點取血，用本研究建立的Beagle犬血漿樣品分析方法測定Beagle犬血漿中的藥物濃度。根據測得的濃度數據，建立血藥濃度-時間曲線，采用非房室模型計算藥動學參數及口服給藥后的絕對生物利用度。
　　 試驗結果表明，Beagle犬單劑量口服GP205(0.75mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內的藥代動力學參數

6、Cmax、tmax、t1/2、 MRT、AUC0～τ、AUC0～∞分別為35.19±10.60ng/ml，3.67±0.52h，6.48±0.48h，11.45±0.86h，380.37±131.22 ng·h/ml,422.09±144.13 ng·h/ml; Beagle犬單劑量口服GP205(1.5mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內的藥代動力學參數Cmax、tmax、t1/2、 MRT、AUC0～τ、AUC0～∞分別為

7、165.12±34.56ng/ml,3.17±0.75h,7.22±1.48h,9.84±1.51h,1061.50±331.06ng·h/ml,1172.98±359.42 ng·h/ml; Beagle犬單劑量口服GP205(3mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內的藥代動力學參數Cmax、tmax、 t1/2、 MRT、AUC0～τ、AUC0～∞分別為329.06±52.61ng/ml,3.17±0.75h,7.56±1.

8、77h,9.48±1.33h,1879.67±381.71 ng·h/ml,2060.24±393.14ng·h/ml; Beagle犬單劑量靜注GP205(0.5mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內的藥代動力學參數C0、t1/2MRT、Cl、Vd、AUC0～τ、AUC0～∞分別為2689.81±487.54ng/ml,12.09±3.13h,8.36±2.82h,0.40±0.05L/h/kg,3.25±0.87L/kg,1

9、120.33±121.04 ng·h/ml，1275.22±156.20 ng·h/ml。GP205在Beagle犬體內吸收的相關藥代動力學參數與給藥劑量基本呈線性相關，說明該藥物在Beagle犬體內的吸收基本呈線性動力學特征。通過對口服給藥中劑量的藥時曲線下面積與經靜注給藥后的藥時曲線下面積相比，計算得到GP205的生物利用度為31.53％，為臨床給藥劑量控制提供重要的理論依據。
　　 三、GP205在Beagle犬體內多劑量

10、給藥的藥物代謝動力學研究
　　 本試驗選用6條成年、健康Beagle犬多劑量口服給藥GP205中劑量(1.5mg/kg)進行多劑量試驗，連續(xù)給藥7天，于第5、6、7三天給藥前取血，在第7天給藥后，按照單劑量取血時間點安排進行取血，以考察多劑量給藥達穩(wěn)態(tài)過程、峰(Cmax)-谷(Cmin)波動系數DF、穩(wěn)態(tài)藥代動力學特征和多劑量給藥體內可能產生的蓄積效應。
　　 試驗結果表明，第五天起，Beagle犬體內GP205的血藥濃

11、度基本上達到穩(wěn)態(tài)，即血藥濃度不再隨給藥次數而增加。通過綜合比較第七天與第一天口服給藥1.5mg/kg的GP205后體內GP205動態(tài)過程藥時曲線、曲線下面積AUC的顯著性差異檢驗、第七天穩(wěn)態(tài)AUC與第一天AUC的平均累積比，提示多劑量第七天口服給藥1.5mg/kg的GP205后體內GP205血藥濃度不產生明顯的蓄積效應。
　　 四、GP205在SD大鼠體內的藥代動力學研究
　　 本研究依據《化學藥物非臨床藥代動力學研究技

12、術指導原則》對試驗動物的要求，對嚙齒類動物——SD大鼠進行單劑量給藥試驗，考察藥物在SD大鼠體內的藥代動力學參數。
　　 試驗采用24只SD大鼠，分成4組，雌雄各半，分別口服給藥低劑量2.5mg/kg、中劑量5mg/kg、高劑量10mg/kg，靜注給藥1mg/kg，于給藥前及給藥后不同時間點取血，用本研究建立的SD大鼠血漿樣品分析方法測定SD大鼠血漿中的藥物濃度。根據測得的濃度數據，建立血藥濃度-時間曲線，采用非房室模型計算藥動

13、學參數及口服給藥后的絕對生物利用度。
　　 結果表明，SD大鼠單劑量口服GP205(2.5mg/kg)后，GP205在SD大鼠體內的藥代動力學參數Cmax、tmax、t1/2、 MRT、AUC0～∞分別為4260.34±400.35ng/ml、6.3±0.8h、12.38±1.51h、19.35±3.22h、70136.79±16623.73 ng·h/ml; SD大鼠單劑量口服GP205(5mg/kg)后，GP205在SD大鼠

14、體內的藥代動力學參數Cmax tmax、t1/2、MRT、AUC0～∞分別為6782.15±749.52ng/ml、6.3±1.5h、13.91±1.48h、22.17±2.18h、135312.81±13439.93 ng·h/ml; SD大鼠單劑量口服GP205(10mg/kg)后，GP205在SD大鼠體內的藥代動力學參數Cmax、tmax、 t1/2、 MRT、AUC0～∞分別為9406.12±582.99ng/ml、6.3±0.

15、8h、17.13±2.88h、25.56±3.47h、206888.49±19318.30ng·h/ml; SD大鼠單劑量靜注GP205(1 mg/kg)后，GP205在SD大鼠體內的藥代動力學參數C0、 t1/2、 MRT、Cl、Vd、AUC0～∞分別為9511.56±442.31ng/ml、16.26±2.99h、20.76±3.41h、0.015±0.006L/h/kg、0.31±0.12L/kg、75210.88±23751.7