乳腺癌細(xì)胞中miR-146a表達調(diào)控的表觀遺傳學(xué)機制.pdf

1、部分miRNAs可以通過抑制癌基因的表達，發(fā)揮腫瘤抑制基因的作用，在腫瘤惡性進程中，常伴隨這部分miRNAs基因沉默失活。HDAC作為輔阻遏物參與形成轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合體，介導(dǎo)腫瘤抑制基因沉默失活導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，用HDACi抑制HDAC活性，能重新激活沉默基因的表達。
　　用HDACiTSA作用于乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞后，檢測到7個miRNAs表達升高，5個miRNAs表達降低；其中miR-146a，在TSA作用前處于沉默狀態(tài)，檢測不到

2、其表達，在TSA作用后表達升高。通過在細(xì)胞中過表達miR-146a，驗證了它可以靶向CXCR43`-UTR，通過抑制翻譯來降低其表達，從而降低SDF-1趨化的腫瘤細(xì)胞侵襲，并抑制腫瘤細(xì)胞生長、增殖，確立了miR-146a作為腫瘤抑制基因的地位。
　　為了研究miR-146a基因表達調(diào)控機制，用5`-RACE實驗確定了miR-146a基因轉(zhuǎn)錄起始位點，用于分析其啟動子區(qū)調(diào)節(jié)因子結(jié)合狀態(tài)。通過染色質(zhì)免疫共沉淀實驗證實，組蛋白H3K56

3、乙?；图せ罨虮磉_緊密相關(guān)，不加TSA刺激時，幾乎檢測不到miR-146a基因啟動子區(qū)組蛋白H3K56乙?；殡S基因沉默；給予TSA刺激時，啟動子區(qū)組蛋白H3K56乙?；斤@著升高，伴隨激活基因表達。
　　進一步的實驗證實，CBP和P300是組蛋白H3K56乙?；D(zhuǎn)移酶，作為輔激動蛋白參與激活miR-146a基因表達；HDAC1是組蛋白H3K56去乙酰化酶，作為輔阻遏物導(dǎo)致miR-146a基因沉默。TSA作用于細(xì)胞，能抑制H

4、DAC1活性，HDAC1作為輔阻遏物的作用被解除，miR-146a基因啟動子區(qū)募集了更多的輔激動蛋白CBP和P300，后者介導(dǎo)了啟動子區(qū)組蛋白H3K56乙酰化，伴隨PolⅡ結(jié)合到啟動子區(qū)，啟動基因轉(zhuǎn)錄，從而揭示了表觀遺傳學(xué)因素參與調(diào)節(jié)miR-146a基因表達的機制。
　　不同腫瘤細(xì)胞中，存在miR-146a基因表觀遺傳學(xué)調(diào)控多樣性，在觀察的乳腺癌，胃癌，肝癌，肺癌，卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中，單獨使用TSA或者聯(lián)合使用去甲基化藥物5