基于腺病毒載體的新型流感疫苗研究及人群中腺病毒、腸病毒的血清流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、本文對(duì)基于腺病毒載體的新型流感疫苗研究及人群中腺病毒、腸病毒的血清流行病學(xué)進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：基于腺病毒載體的新型流感疫苗研究。流感病毒是引起流行性感冒的主要病原體。血凝素是流感病毒表面免疫原性最強(qiáng)的抗原成分,刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體,因此血凝素作為免疫原被應(yīng)用于新型通用型流感疫苗的研究。重組腺病毒作為一種重要的基因表達(dá)載體,具有高表達(dá)、可同時(shí)誘導(dǎo)特異性體液免疫和細(xì)胞免疫、安全性好、易于制備等優(yōu)點(diǎn)。人

2、5型腺病毒(human adenovirus type5,AdHu5)曾被廣泛應(yīng)用于各種疫苗研究,但人群中普遍存在AdHu5的預(yù)存中和抗體,使AdHu5作為疫苗載體的臨床應(yīng)用受限。為克服預(yù)存中和抗體的影響,稀有人血清型或來(lái)自于其它種屬的腺病毒被發(fā)展為新型疫苗載體。源于黑猩猩的腺病毒在人群中的血清陽(yáng)性率較低,免疫原性強(qiáng),被證明是一種理想的疫苗載體。以腺病毒黑猩猩血清型68(chimpanzee adenovirus type68, AdC

3、68)載體為平臺(tái),將多種不同亞型的流感病毒HA基因克隆至該腺病毒載體,構(gòu)建成表達(dá)不同 HA的重組腺病毒庫(kù),以此作為新型流感疫苗,并研究其免疫反應(yīng)及免疫保護(hù)效果。通過(guò)分子克隆手段,我們將H1N1、H2N2、H3N2、H4N2、H5N1、H6N6、H7N2、H9N2及H7N9等流感病毒的HA基因分別克隆至 AdC68載體,并獲得相應(yīng)的重組腺病毒。表達(dá)H7N9 HA的重組腺病毒免疫小鼠后顯示,該疫苗成功誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生血凝抑制抗體和針對(duì)H7N9

4、HA的特異性抗體;分型抗體檢測(cè)顯示可誘導(dǎo)高滴度的IgG2b。因此基于重組腺病毒載體的流感疫苗可刺激小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫。
　　第二部分：中國(guó)健康成人中腸病毒和腺病毒的血清流行病學(xué)調(diào)查。近年來(lái),手足口病(Hand, foot and mouth disease,HFMD)成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。腸病毒71(Enterovirus71,EV71)和柯薩奇病毒16(Coxsackievirus16, CA16)是引起手足口病

5、的主要病原體。這兩種病毒主要感染7歲以下兒童,但也有成人感染而致病。另外,在有些地方腺病毒和腸病毒共感染成為手足口病另一致病因素。因此,我們調(diào)查中國(guó)健康成人血清中針對(duì)腸病毒和腺病毒的中和抗體的流行情況,以探討這些病毒的流行趨勢(shì)以及人群的免疫力。我們共收集了391份健康成人血清,通過(guò)微量中和試驗(yàn)檢測(cè)血清中針對(duì)EV71、CA16、人腺病毒5型(adenovirus human serotype5,AdHu5)和黑猩猩腺病毒7型(chimpa

6、nzee adenovirus pan7,AdC7)病毒的中和抗體滴度。結(jié)果顯示EV71、CA16、AdHu5三種病毒在人群中的陽(yáng)性率較高,分別為85.7％、58.8％和74.2％。三種病毒都為陽(yáng)性的血清陽(yáng)性率為39.4％(154/391),其中各病毒中和抗體滴度的中位數(shù)分別為:80、40和640。分析發(fā)現(xiàn) EV71中和抗體效價(jià)與 CA16、AdHu5有一定的相關(guān)性。AdC7在人群中的血清陽(yáng)性率較低,為11.8％。由于人群中針對(duì)AdC7