白藜蘆醇抑制TGF-β-Smad3通路改善心肌纖維化.pdf

1、目的：研究RSV激活SIRT1在EAM發(fā)展至DCM過程中的作用，探討SIRT1去乙?；瘜?duì)TGF-β1/Smad3信號(hào)通路的影響及其與心肌纖維化的關(guān)系。
　　方法：
　?。ㄒ唬┲苽銭AM/DCM模型：30只雄性Lewis大鼠隨機(jī)分為兩大組，（1）實(shí)驗(yàn)組，于實(shí)驗(yàn)第0d、7d在大鼠左右后肢足墊注射豬心肌肌球蛋白與弗氏完全佐劑混合乳化液；（2）正常對(duì)照組，用PBS代替豬心肌肌球蛋白進(jìn)行注射。兩大組再按21d、56d和90d時(shí)間點(diǎn)分成

2、三個(gè)亞組。對(duì)各組大鼠進(jìn)行心臟超聲檢測后處死，稱量心臟重量與體重；取心臟組織行HE、MASSON和苦味酸-天狼猩紅染色染色；RT-QPCR技術(shù)檢測ColⅠ、ColⅢmRNA的表達(dá)水平。
　?。ǘ㏑SV干預(yù)：20只雄性Lewis大鼠隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組、DCM組、RSV低劑量組（10mg/kg/d）、RSV高劑量組（50 mg/kg/d），每組5只。同上述構(gòu)建模型，于初次免疫后28d起，灌胃干預(yù)，每日一次。于初次免疫第90d后同

3、上述方法實(shí)行心臟超聲檢測，稱重，病理學(xué)檢查，RT-QPCR檢測心臟組織ColⅠ、ColⅢ、SIRT1mRNA的表達(dá)水平；免疫共沉淀和Western-blot檢測SIRT1、p-Smad3、Ac-Smad3蛋白表達(dá)以及SIRT1與Smad3的相互作用。
　　結(jié)果：
　?。ㄒ唬?shí)驗(yàn)組與同期正常對(duì)照組比較
　　1．心臟彩超：第21d、56d、90d實(shí)驗(yàn)組LVEDD、LVESD增加（P＜0.01），第56d、90d實(shí)驗(yàn)組左心室

4、收縮功能明顯減退，LVEF、FS明顯降低（P＜0.01）。
　　2．MASSON染色與苦味酸天狼猩紅染色，見心臟膠原纖維56d明顯增多，90d彌漫性增加，呈大片網(wǎng)格狀改變。偏振光顯微鏡下，以Ⅰ型膠原增加為主。
　　3．第21d實(shí)驗(yàn)組ColⅠmRNA表達(dá)增高（P<0.05），ColⅢmRNA無明顯改變（P>0.05）；56 d與90d實(shí)驗(yàn)組ColⅠ、ColⅢmRNA表達(dá)呈進(jìn)行性升高（P<0.01）。
　?。ǘ㏑SV干預(yù)

5、結(jié)果
　　1．超聲心動(dòng)圖檢測：與DCM組相比，RSV干預(yù)組LVEDD、LVESD明顯降低，LVEF、FS明顯增加（P＜0.01）。
　　2．MASSON染色與苦味酸天狼猩紅染色，DCM組心臟膠原纖維明顯增多，偏振光顯微鏡下，見Ⅰ、Ⅲ型膠原大量增生，RSV低劑量組有所減少，RSV高組明顯減少。
　　3．RSV低劑量組ColⅠ、ColⅢmRNA低于DCM組，高于正常對(duì)照組和RSV高劑量組（P<0.01），SIRT1 mRN

6、A表達(dá)高于 DCM對(duì)照組和正常對(duì)照組，低于RSV高劑量組（P<0.01）。
　　4．DCM組p-Smad3和Ac-Smad3的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，RSV干預(yù)組p-Smad3均未顯著下調(diào)。DCM組SIRT1表達(dá)量明顯降低，Ac-Smad3表達(dá)顯著升高。RSV低劑量組Ac-Smad3表達(dá)低于DCM對(duì)照組，高于RSV高劑量組。
　　結(jié)論：
　　1．用豬心肌肌球蛋白免疫大鼠，能制備出EAM模型，晚期發(fā)展為DCM。