黑麥染色體組特異PCR標(biāo)記的建立及其小麥-非洲黑麥1RS-1BL染色體新易位系的獲得.pdf

1、小麥（Triticum aestivum L）是世界上重要的糧食作物之一。在中國它僅次于水稻，因此小麥生產(chǎn)對國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展有十分重要的戰(zhàn)略意義。但隨著小麥栽培品種單一化導(dǎo)致基因大量流失，使其遺傳基礎(chǔ)日益狹窄和抗源匱乏，對其產(chǎn)量和品質(zhì)的進(jìn)一步改良起著極大的限制作用。小麥的近緣物種中存在著大量的遺傳變異，是小麥改良可以利用的豐富有益基因資源。其中以栽培黑麥?zhǔn)亲顬槌晒玫亩扼w物種。黑麥上攜帶有許多有益的目標(biāo)基因，如高產(chǎn)、廣適、抗小麥三銹和白

2、粉病等有益基因，成為改良小麥抗性、產(chǎn)量、品質(zhì)和適應(yīng)性等性狀的豐富的基因資源。黑麥染色質(zhì)的檢測是小麥染色體工程育種研究的重要內(nèi)容,包括大量形態(tài)學(xué)，細(xì)胞學(xué)，蛋白質(zhì)，和分子標(biāo)記等方法被應(yīng)用在跟蹤染色質(zhì)的導(dǎo)入之中。本研究根據(jù)黑麥染色質(zhì)中存在的高度重復(fù)序列，建立了一個(gè)新型的黑麥染色體組特異PCR分子標(biāo)記，快速、準(zhǔn)確的鑒定外源染色質(zhì)向小麥中的引入，并且結(jié)合酸性聚丙烯酰胺凝膠電泳（APAGE）和熒光原位雜交（FISH）相互印證。研究結(jié)果如下：

3、　　1、高度重復(fù)序列（AF305943）設(shè)計(jì)特異PCR引物對供試材料進(jìn)行分析鑒定。表明該序列存在于黑麥全部染色體上，引物20H可以作為黑麥屬的特異引物。而且還可以對1RS/1BL易位系、小麥-黑麥附加系進(jìn)行鑒定，其中在材料L1，L8-11,L13，L15，L16能夠擴(kuò)增出約1400bp的目標(biāo)條帶，這些結(jié)果表明該特異引物不僅可以用于栽培黑麥優(yōu)異基因的轉(zhuǎn)移，而且對黑麥屬野生種的鑒定和染色質(zhì)轉(zhuǎn)移。
　　2、利用APAGE對材料BC2F4

4、株系L1-L20部分進(jìn)行了醇溶蛋白分析，電泳共分離出24條帶，材料在ω，γ區(qū)存在較大差異，充分體現(xiàn)了不同材料在編碼醇溶蛋白基因水平上的多態(tài)性。根據(jù)GliB11位點(diǎn)的有無,L8,L9,L10,L15,L16可能具有來自非洲黑麥新型1RS/1BL染色體易位系，進(jìn)一步印證了PCR鑒定結(jié)果。
　　3、利用20H序列作探針對材料小黑麥進(jìn)行原位雜交，結(jié)果表明20H序列分布于所有黑麥染色體除端部和核仁組織的所有區(qū)域。進(jìn)一步用此探針對材料 L1－