黑麥1rs特異保守序列克隆及1bl.1rs易位系中反轉(zhuǎn)座子ltr的表達(dá)研究

1、S i c h u a n A g r i c u l t u r e U n i v e r s i t yP h ·M ·D i s s e r t a t i o nC l o i n g r y e 1 R S s p e c i f i cc o n s e r v e d s e q u e n c ea n d E x p r e s s i o no f1 B L ．1 R S t r a n s l

2、 o c a t i o nl i n e sL T R r e t r o t r a n s p o s o nB y C h e n L e iD i r e c t e d b yP r o f ．F US h u l a nB i o c h e m i s t r y a n d M o l e c u l a r B i o l o g y( W h e a t M o l e c u l a r C y t o g e

3、n e t i c s )C h e n g d u ，6 1 1 1 3 0 ，S i c h u a n2 0 1 5 ，3摘要小麥( T r i t i c u ma e s t i v u m L ．，A A B B D D ) 是我國僅次于水稻的第二大糧食作物，也是世界上重要的糧食作物之一。攜帶1 B L ．1 R S 易位染色體的小麥品種( 系)由于具有高產(chǎn)抗病的特性而在全世界大量推廣種植。然而，由于1 R S 來源單一，人

4、們考慮最多的問題是如何拓寬1 B L ．1 R S 易位系的遺傳多樣性。目前開發(fā)的1 R S特異分子標(biāo)記為1 B L ．1 R S 在小麥育種中的應(yīng)用研究提供了方便，但對于眾多已公布的1 R S 特異分子標(biāo)記，其通用性及標(biāo)記擴(kuò)增的序列特征還缺乏細(xì)致的研究。此外，小麥基因組中含大量反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子序列且具有一定的生物學(xué)功能。目前對1 B L ．1 R S 易位品種( 系) 中的反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子序列的表達(dá)情況缺乏研究。因此，本實(shí)驗(yàn)選取9 個(gè)在我國具

5、有代表性的1 B L ．1 R S 易位或1 R S ．7 D L ，7 D S ．1 B L 易位品種( 系) 以及本課題組培育的9 個(gè)姊妹1 B L ．1 R S 易位系為材料，考察了1 4 2 對已公布的I R S 特異引物的通用性，對部分產(chǎn)物進(jìn)行了克隆測序，同時(shí)研究了姊妹1 B L ．1 R S 易位系中反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的L T R ( 長末端重復(fù)序列) 的表達(dá)情況。本實(shí)驗(yàn)首先采用原位雜交的方法對小麥品種進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定分析，再通過P

6、 C R 分子標(biāo)記技術(shù)篩選1 R S 特異標(biāo)記，然后將這些1 R S 特異保守序列進(jìn)行克隆測序分析，最后對姊妹1 B L ．1 R S 易位系中反轉(zhuǎn)座子L T R 的表達(dá)情況進(jìn)行了初步分析，得到如下創(chuàng)新性的研究結(jié)果：1 ．對實(shí)驗(yàn)所用材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定，確定所用的7 個(gè)小麥品種( 系) 以及9 個(gè)姊妹系材料均為1 B L ．1 R S 易位系，此外，還有魯麥1 1 和濟(jì)南1 6 兩個(gè)小麥品種( 系) 為1 R S ．7 D L 、7 D

7、S ．1 B L 易位系，其余7 個(gè)對照材料均為不含黑麥染色質(zhì)成分的純系小麥。2 ．通過P C R 擴(kuò)增，對所報(bào)道的1 4 2 對1 R S 特異引物進(jìn)行篩選，只有2 7 對引物能從本實(shí)驗(yàn)所用的7 個(gè)1 B L ．I R S 易位系和2 個(gè)I R S ．7 D L 、7 D S ．1 B L 易位系中擴(kuò)增出1 R S 特異條帶，而對照組中的C S ，M Y l l ，C N 2 7 ，C M l 0 7 ，J 1 0 2 5 ，R 3

8、4 5 ，R 2 9 7 沒有擴(kuò)增出條帶。這2 7 對特異引物分別是：T S M 3 9 ，T S M 8 1 ，T S M 8 6 ，T S M 9 2 ，T S M l 0 3 ，T S M l 0 9 ，T S M l 11 ，T S M l 2 3 ，T S M 2 6 4 ，T S M 2 9 4 ，T S M 3 0 3 ，T S M 3 0 6 ，T S M 3 9 1 ，T S M 4 6 0 ，T S M 6 3 4