清肝抑纖飲及其拆方防治大鼠肝纖維化的實驗研究.pdf

1、目的:觀察清肝抑纖飲及其拆方對大鼠肝纖維化的防治作用,并探討其作用機制。
　　方法:110只Wistar大鼠按隨機原則分為9組?？瞻讓φ战M給予普通飼料喂養(yǎng),自由飲水。其余各組均給予四肢及背部皮下注射40％CCl4-花生油溶液,按照0.3ml/100g,每周注射兩次,同時給予中藥或生理鹽水灌胃,共8周。8周后進行成模檢驗,明確造模成功后,將其余大鼠全部處死,測量大鼠體重及肝臟濕重,計算肝臟臟器指數(shù);檢測各組大鼠血清肝功能指標(ALT

2、、AST、ALB)、血清肝纖維化指標(HA、LN、C-IV);檢測各組大鼠肝組織勻漿丙二醛(MDA)含量以及超氧化物岐化酶(SOD)活性;ELISA法檢測大鼠肝組織勻漿腫瘤壞死因子-α(TNF-a)、轉化生長因子-β1(TGF-β1)、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)及組織金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)濃度;采用RT-PCR法檢測肝組織TGF-β1mRNA表達;TUNEL一步法檢測肝星狀細胞凋亡;肝組織病理學觀察:HE染色半定量

3、觀察肝組織炎性程度;Masson染色觀察肝內(nèi)膠原沉積與降解狀態(tài);免疫組織化學的方法觀察α-SMA在各組大鼠肝組織內(nèi)的表達,結果作定量分析。
　　結果:實驗數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學處理后發(fā)現(xiàn):1、清肝抑纖飲及其拆方可使血清ALT、AST含量下降,ALB升高,升高SOD活性,降低MDA含量,顯著改善肝臟炎癥程度及減輕脂質過氧化損傷,全方組療效優(yōu)于各拆方組,拆方研究發(fā)現(xiàn)方中清熱解毒及涼血活血藥物起主要作用;2、清肝抑纖飲及其拆方可使肝組織中α-SM

4、A表達明顯降低,抑制HSC活化,方中清熱解毒與涼血活血藥物的配伍在抑制HSC活化過程中起主要作用,各治療組大鼠HSC凋亡率均有所升高,但與模型組比較無顯著性差異;3、肝纖維化大鼠TGF-p1從mRNA到蛋白水平均明顯異常表達,其升高程度與肝纖維化的嚴重程度相關,清肝抑纖飲及其拆方可明顯降低其表達,與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01,P＜0.01);4、清肝抑纖飲及其拆方可顯著降低肝組織TNF-α含量,含有清熱解毒藥物的組別療效明顯

5、;5.清肝抑纖飲及其拆方可使TIMP-2降低,提高MMP-2/TIMP-2比例,含有涼血活血藥物的組別療效較為顯著,其中全方組療效最好,與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)。
　　結論:清肝抑纖飲具有明確的防治肝纖維化作用,其主要作用機制為:1、減輕肝細胞變性壞死及肝臟脂質過氧化損傷程度,改善肝臟炎癥,提高其抗氧化能力,促進肝細胞修復,從而減少或消除肝纖維化的誘發(fā)因素,以阻斷肝纖維化的起始環(huán)節(jié);2、抑制HSC的活化,促進其凋亡