柔肝消癥飲抗肝硬化大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:柔肝消癥飲由香附、青皮、炙黃芪、炒白術(shù)、白芍、三棱、莪術(shù)、地鱉蟲、郁金、姜黃、丹參等藥物組成,具有疏肝健脾,行氣活血,逐瘀消癥的功效,為導(dǎo)師經(jīng)多年臨床觀察篩選的效方,對(duì)肝硬化具有較好的治療效果,為探討其作用機(jī)制,本研究采用復(fù)合因素造模法復(fù)制肝硬化大鼠模型,分組治療后,通過觀察該藥對(duì)肝組織病理形態(tài)學(xué)以及天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)的影響,探討了其對(duì)肝臟的保護(hù)作用;通過觀

2、察對(duì)Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)、層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)以及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的影響,探討本方逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用機(jī)制。 方法:選取SD大鼠60只,雌雄各半,正常喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為造模組48只和正常對(duì)照組12只。造模組首次予皮下注射40%CCl<,4>花生油溶液0.5ml/100g,以后每周2次皮下注射0.3ml/100g,共9周。造模開始前2周均以20%豬油、0.5%膽固醇、79.5%

3、玉米面混合飼料喂養(yǎng),第3~9周以0.5%膽固醇和99.5%玉米面混合飼料喂養(yǎng)。造模期間以30%乙醇作為飲料讓大鼠自由飲用。正常對(duì)照組則以正常飼料和純凈水喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)9周末確認(rèn)造模成功后予以分組治療。除正常組外,將造模組大鼠隨機(jī)分為4組,每組10只,雌雄各半,給藥情況:①正常組:灌服生理鹽水;②模型組:灌服生理鹽水;③柔肝消癥飲高劑量組:用藥劑量為2.9g.100g體重;④柔肝消癥飲低劑量組:用藥劑量為1.45g/100g體重;⑤對(duì)照組:用

4、復(fù)方鱉甲軟肝片溶液,0.1g/100g體重。5組均于造模結(jié)束后第2天起連續(xù)灌服生理鹽水或治療藥物,每日1次,共4周,并于最后一次給藥禁食12h后,用10%水合氯醛(0.2ml/kg)將大鼠麻醉,腹部正中切口,腹主動(dòng)脈取血,將血樣低溫離心,分離血清,采用比色法測(cè)定血清ALT、AST、TP、Alb含量;采用放免法測(cè)定血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA的含量;采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)肝組織bFGF的變化。同時(shí)迅速剖取動(dòng)物肝臟,在肝臟最大葉距邊緣0.5c

5、m處取1cm×1cm×1cm大小肝組織,4%多聚甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,并用HE染色和Masson染色,光鏡下觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果:1、柔肝消癥飲對(duì)肝硬化大鼠血清ALT、AST、TP、Alb含量的影響模型組大鼠血清ALT、AST含量明顯升高,ALb和TP含量明顯降低,與正常組比較均具有顯著性差異(P<0.01);經(jīng)用藥治療后,各治療組血清ALT、AST含量明顯下降,Alb和TP含量明顯升高,與模型組比較高劑量組

6、和對(duì)照組均有顯著性差異(P<0.01),其中低劑量組AST含量和Alb含量與模型組比較亦有顯著性差異(P<0.01);與對(duì)照組比較,低劑量組血清Alb含量明顯降低(P<0.01)。(Table2) 2、柔肝消癥飲對(duì)肝硬化大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)改變和膠原纖維增生程度的影響:(1)柔肝消癥飲對(duì)肝硬化大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)改變的影響:肉眼觀察正常組大鼠肝臟柔軟,紅潤(rùn),被膜光滑;模型組大鼠肝臟體積有所增大,質(zhì)地變硬,色黯紅,切面可見多有小結(jié)

7、節(jié);高、低劑量組和對(duì)照組肝臟體積、質(zhì)地、色澤均明顯改善,接近正常組,與模型組比較有明顯差別。光鏡觀察正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰,肝小葉結(jié)構(gòu)正常,肝細(xì)胞排列規(guī)則成索狀,在中央靜脈周圍呈放射狀分布,肝血竇結(jié)構(gòu)清晰,無異常改變,肝細(xì)胞呈多邊形,胞漿均勻,細(xì)胞核形態(tài)正常(Fig.1);模型組大鼠肝小葉正常結(jié)構(gòu)消失,間質(zhì)內(nèi)彌漫性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),肝細(xì)胞體積明顯增大,局部肝細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重的脂肪變性,可見到再生的肝細(xì)胞(雙核),肝間質(zhì)廣泛纖維組織增生,

8、將正常肝小葉分割成大小不等的肝細(xì)胞團(tuán)(即假小葉形成)(Fig.2);高劑量組可見正常肝小葉,少數(shù)肝小葉結(jié)構(gòu)亦受損,少數(shù)肝細(xì)胞氣泡樣變性但僅偶見壞死細(xì)胞,較少炎性細(xì)胞浸潤(rùn),少量纖維組織增生,但未見形成間隔(Fig.3);低劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,部分肝細(xì)胞氣泡樣變性并伴有細(xì)胞壞死,較多淋巴、單核細(xì)胞浸潤(rùn),纖維組織增生,但較少形成間隔(Fig.4);對(duì)照組與低劑量組基本相似(Fig.5)。 (2)柔肝消癥飲對(duì)肝硬化大鼠膠原纖維增生程度的影響

9、:模型組大鼠膠原纖維增生程度較正常組明顯升高,組間比較有顯著性差異(P<0.01)。經(jīng)用藥治療后,高、低劑量組和對(duì)照組膠原纖維增生程度均有明顯下降,與模型組比較有顯著性差異(P<0.05),其中高劑量組作用最為顯著,其膠原纖維增生程度明顯輕于低劑量組和對(duì)照組,組間比較均有顯著性差異(P<0.05)。柔肝消瘢飲可明顯降低膠原纖維增生程度,且作用優(yōu)于復(fù)方鱉甲軟肝片。(Table 1)3柔肝消癥飲對(duì)肝硬化大鼠血清PCⅢ、Ⅳ-C、HA、LN含量

10、的影響模型組大鼠血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA含量均較正常組明顯升高(P<0.05);經(jīng)用藥治療后,高劑量組和對(duì)照組血清HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN含量與模型組比較均有明顯下降(P<0.05),其中低劑量組Ⅳ-C和PCⅢ含量與模型組比較亦有顯著性差異(P<0.05),而低劑量組血清HA、LN含量雖然有所下降,但與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高劑量組Ⅳ-C含量與對(duì)照組比較明顯下降(P<0.05)。(Table3)4柔肝消癥飲

11、對(duì)肝硬化大鼠肝組織堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的影響模型組大鼠肝組織bFGF含量均明顯高于正常組(P<0.01);給藥治療后,各治療組大鼠肝組織bFGF含量均明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05);高劑量組可明顯降低肝組織bFGF含量,與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。說明柔肝消癥飲降低肝組織bFGF含量作用明顯優(yōu)于復(fù)方鱉甲軟肝片。(Table 4) 結(jié)論:柔肝消癥飲由香附、青皮、炙黃芪、炒白術(shù)、白芍、三棱、

12、莪術(shù)、地鱉蟲、郁金、姜黃、丹參等藥物組成,具有疏肝健脾,行氣活血,逐瘀消癥的功效,經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明: 1、柔肝消癥飲能明顯降低肝硬化模型大鼠血清ALT、AST含量,提高TP、Alb含量,具有減輕肝細(xì)胞損傷、改善肝功能的作用。 2、柔肝消癥飲具有減輕肝細(xì)胞壞死程度,促進(jìn)肝細(xì)胞再生,抑制膠原纖維合成的作用。 3、柔肝消癥飲能顯著下調(diào)肝硬化模型大鼠血清異常升高的PCⅢ、Ⅳ-C、HA、LN的含量,具有抑制肝纖維化,減緩肝硬

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