RNA干擾Survivin基因對大腸癌Lovo細胞的生物學特性的影響.pdf

1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文RNA干擾Survivin基因對大腸癌Lovo細胞的生物學特性的影響姓名：熊英申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學（消化系統(tǒng)疾病）指導教師：郭文20070508中文摘要酸突出末端的19～23nt的小分子干擾核糖核酸(smallinterferenceRNA，siRNA)或短發(fā)夾RNA(shothairpinRNA，shRNA)，作為RNAi的中介分子，通過序列互補配對法則特異性降解目的基因，抑制序列特異性的基因表達。R

2、NA干擾技術具有高度序列特異性特征，能夠識別正常和變異基因副本間在單個核苷酸上的差別，并在此基礎上對正常和變異基因作出區(qū)分，最終只“敲除”變異基因，麗不影響正?；虻墓δ?。另外，還具有高效性特征，RNAi存在瀑布放大效應，每個細胞僅需幾分子siIⅢA就可產(chǎn)生RNAi效應，并可達到缺失突變體表型的程度。相比普通的siRNA，具有短發(fā)卡結構的雙鏈RNA，穩(wěn)定性比siRNA更好，而且能增加阻斷基因表達的時問。本研究應用RNA干擾技術將靶向Su

3、rvivin基因的siRNA瞬時轉染大腸癌離體細胞株Lovo，觀察Lovo細胞Survivin基因表達情況后，根據(jù)siRNA序列設計、合成shRNA并構建shRNA質粒表達載體，脂質體介導轉染Lovo細胞并篩選穩(wěn)定表達細胞株后，檢測穩(wěn)定表達細胞的生長周期和增殖情況。研究目的在于給大腸癌Survivin基因治療的可行性提供依據(jù)。方法一、設計靶向Survtvin基因的$iRNA，瞬時轉染大腸癌離體細胞Lovo，觀察Survivia基因的表達

4、情況1siRNA的設計應用siRNA設計軟件初篩出9對，再進行BLAST分析剔除與其他編碼同源性的siRNA，最后經(jīng)RNA結構分析軟件分析將對應的基因序列位于二級結構的siRNA篩除，選出2對靶向Survivin的姍(SurvivinsiRNA1和SurvivinsiRNA2)。2瞬時轉染大腸癌Lovo細胞采用脂質體轉染技術將SurvivinsiRNA轉染Lovo細胞，轉染72小時后進行相應檢測。3各項指標的檢測用realtimeRTP