PTEN、VEGF在犬乳腺腫瘤中的表達(dá)及藥物治療犬乳腺癌動(dòng)物模型的研究.pdf

1、乳腺腫瘤在母犬最為常見(jiàn)。抑癌基因PTEN及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在乳腺腫瘤中的表達(dá)人醫(yī)中研究比較多，而在犬乳腺腫瘤中報(bào)道很少。為此，我們采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫組織化學(xué)兩種方法檢測(cè)了它們?cè)谌橄倌[瘤組織中的表達(dá)情況，以觀察其表達(dá)水平的高低是否與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)，并原代培養(yǎng)了一犬乳腺癌細(xì)胞系(CMT1211)，將純化好的癌細(xì)胞接種裸鼠建立犬乳腺癌模型，進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)，具體研究?jī)?nèi)容如下： 1．對(duì)從2005年7月到2006

2、年8月收集的50例犬乳腺腫瘤進(jìn)行組織病理學(xué)分類，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法對(duì)犬乳腺腫瘤病例新鮮腫塊中VEGFmRNA和PTENmRNA的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示：PTEN mRNA在正常犬乳腺組織中的相對(duì)表達(dá)量與良性乳腺腫瘤兩者之間差異不顯著(P>0.05)。在惡性乳腺腫瘤組織中PTEN mRNA表達(dá)量與正常犬乳腺組織和良性乳腺腫瘤相比較，差異極顯著(P<0.01)。VEGF mRNA在正常犬乳腺組織中的相對(duì)表達(dá)量與其在良性乳腺腫瘤

3、的表達(dá)兩者之間差異不顯著(P>0.05)。惡性乳腺腫瘤組織中VEGF mRNA變化范圍較大，與正常犬乳腺組織和良性乳腺腫瘤相比較，差異極顯著(P<0.001)。發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的犬乳腺腫瘤其VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量為與其它惡性犬乳腺腫瘤組織比較差異顯著(P<0.01)。 2．采用免疫組織化學(xué)SP方法法對(duì)犬乳腺腫瘤病例中VEGF、PTEN蛋白進(jìn)行檢測(cè)，并分析VEGF‘、PTEN表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果顯示：PTEN染

4、色主要定位于增生的乳腺上皮或癌巢細(xì)胞漿，少量可見(jiàn)于核膜染色。乳腺腫瘤組織中PTEN基因表達(dá)與犬的年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.01)。VEGF。染色定位于腫瘤及周圍血管，少量肌上皮細(xì)胞漿，乳腺腫瘤組織中VEGF蛋白表達(dá)與患病犬的年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)(P>005)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。 3．從臨床收集一犬乳腺癌病例對(duì)腫瘤組織其進(jìn)行原代培養(yǎng)和初步鑒定，將純化好的腫瘤細(xì)胞接種裸鼠右側(cè)背部皮下

5、，建立異種腫瘤種植模型，用免疫組化的方法檢測(cè)VEGF在犬乳腺癌裸鼠模型中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示：42天后處死的裸鼠移植腫瘤組中VEGF蛋白呈高表達(dá)，與14天和28天處死的裸鼠相比，兩者存在顯著性差異(P<0.05)。 4．將藥物環(huán)磷酰胺(CTx)、長(zhǎng)春新堿(VCR)、亞硒酸鈉(Na<,2>SeO<,3>)對(duì)CMT1211細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)外試驗(yàn)，計(jì)算不同藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率。體外試驗(yàn)結(jié)果顯示：CTX對(duì)腫瘤細(xì)胞基本沒(méi)有抑制作用，其它兩種