抗生素預(yù)處理對口服Der p2重組恥垢分枝桿菌調(diào)節(jié)BALB-c小鼠Th1-Th2平衡的影響.pdf

1、背景：
　　Th1和Th2是CD4+T細(xì)胞的兩個(gè)功能亞群,起源于同一前體—Th0細(xì)胞,正常情況下二者處于平衡狀態(tài)。Th1/Th2平衡紊亂是許多疾病的免疫學(xué)基礎(chǔ),其中,Th2優(yōu)勢狀態(tài)與過敏性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。許多因素參與Th1/Th2的分化調(diào)節(jié),其中最重要的體內(nèi)因素是細(xì)胞因子(如IL-4、IFN-γ、IL-12)和抗原提呈細(xì)胞;而最重要的體外因素則是抗原,如花粉、塵螨抗原等過敏原,和哮喘的發(fā)生有著直接關(guān)系。
　　研究發(fā)現(xiàn),分

2、枝桿菌可以調(diào)節(jié)Th1和Th2平衡,例如,牡牛分枝桿菌的應(yīng)用降低了過敏原致敏小鼠Th2型細(xì)胞因子水平;霧化吸入BCG或其他分枝桿菌,可刺激小鼠肺泡Mφ釋放IL-12、IFN-γ和IFN-β等Th1型細(xì)胞因子。這些結(jié)果說明,分枝桿菌可以作為調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答模式的工具。恥垢分枝桿菌(MycobacteriumSmegmatis,M.S)由于其快速的繁殖力,高效的轉(zhuǎn)化率以及無致病性等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)逐漸被認(rèn)為是一種理想疫苗。
　　相關(guān)研究表明,M

3、.S具有良好的免疫原性,它能夠抑制Th2型免疫反應(yīng),同時(shí)提升Th1型免疫應(yīng)答。我們前期構(gòu)建的Derp2重組恥垢分枝桿菌(pCW-Derp2-rM.S),通過動物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了其可以逆轉(zhuǎn)Th2優(yōu)勢免疫反應(yīng),但是pCW-Derp2-rM.S相對于腸道來說是外來細(xì)菌,由于和腸道的親和力不高從而影響了免疫效果,所以我們本次研究的目的主要是探索抗生素預(yù)處理之后口服pCW-Derp2-rM.S是否能夠提高免疫效果。
　　目的：
　　1.探

4、索抗生素預(yù)處理前后腸道對口服疫苗M.S及pCW-Derp2-rM.S的影響。
　　2.比較抗生素預(yù)處理前后分別口服免疫M(jìn).S及pCW-Derp2-rM.S,小鼠血清中各細(xì)胞因子及抗體的變化。
　　3.探索抗生素預(yù)處理后前后口服M.S及pCW-Derp2-rM.S對小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中各細(xì)胞因子和T細(xì)胞亞群的影響。
　　實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果：
　　1.相關(guān)淋巴樣組織(GALT)中細(xì)菌計(jì)數(shù)
　　不同抗生素預(yù)處理后分別給

5、予小鼠口服免疫M(jìn).S及pCW-Derp2-rM.S,在末次免疫后第2、14、28和56天脫頸處死小鼠,無菌收集腸道GALT后勻漿并涂布于7H10培養(yǎng)基上培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示,抗生素預(yù)處理后,M.S/pCW-Derp2-rM.S經(jīng)口服可以在GALT中以活菌的狀態(tài)存留,數(shù)量在第14天達(dá)到高峰(P<0.05),隨后逐漸減少,和生理鹽水組對比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。pCW-Derp2-rM.S組與M.S組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)

6、,三種抗生素之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　2.抗生素預(yù)處理口服M.S及pCW-Derp2-rM.S對BALB/c小鼠血清中細(xì)胞因子及抗體的影響
　　抗生素預(yù)處理小鼠后分別口服接種兩種不同疫苗,在末次免疫后第2、4、8、10周分別用ELISA檢測小鼠外周血中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4水平及抗體IgG1、IgG2a的水平。結(jié)果顯示:生理鹽水或抗生素溶液預(yù)處理小鼠后,接種M.S/pCW-Derp2-rM.S與接種甘油相

7、比其血清中IFN-γ、IgG2a/IgG1水平隨著時(shí)間的延長逐漸升高,IL-4水平隨著時(shí)間的延長而降低,其中IFN-γ、IL-4在末次免疫后第8周變化明顯,IgG2a/IgG1在末次免疫后第4、8周變化明顯,pCW-Derp2-rM.S組高于M.S組(P<0.05);抗生素預(yù)處理與生理鹽水處理后相比,口服甘油后IFN-γ、IgG2a/IgG1水平降低,IL-4水平升高,但接種M.S/pCW-Derp2-rM.S后可提升IFN-γ和IgG

8、2a/IgG1水平,降低IL-4水平,且抗生素預(yù)處理后口服M.S/pCW-Derp2-rM.S與生理鹽水預(yù)處理組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　3.抗生素預(yù)處理口服M.S及pCW-Derp2-rM.S對BALB/c對小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中各細(xì)胞因子和T細(xì)胞亞群的影響
　　抗生素預(yù)處理小鼠后分別口服接種兩種不同疫苗,在末次免疫后第2、4、8、10周分別用ELISA、ELIPOT及流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測小鼠脾臟中各細(xì)胞因子

9、和T細(xì)胞亞群。結(jié)果顯示:口服接種pCW-Derp2-rM.S與M.S后第8周,免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中Th1型細(xì)胞因子IFN-γ高于Th2型細(xì)胞因子IL-4,且pCW-Derp2-rM.S與M.S相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);口服抗生素后IL-4升高IFN-γ下降,而接種疫苗后免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中分泌IFN-γ明顯升高,IL-4明顯降低,與生理鹽水預(yù)處理后相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.腸道對口服