輪狀病毒多抗原表位RE-LTA2-LTB融合基因在煙草中的表達(dá)及轉(zhuǎn)Vp4、Vp7基因苜蓿的免疫學(xué)研究.pdf

1、輪狀病毒(Rotavirus，RV)屬于呼腸病毒科(Reovrridase)輪狀病毒屬(Rotaviras)，義名雙層病毒(Duoviruses)，是引起嬰幼兒和多種幼齡動(dòng)物急性腹瀉的主要病原體。輪狀病毒基因中與腹瀉有關(guān)的是其主要外殼蛋白Vp4和Vp7，是輪狀病毒的主要保護(hù)性抗原，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。研制以抗原表位為基礎(chǔ)的輪狀病毒亞單位疫苗，并利用植物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因植物疫苗具有重要的實(shí)用價(jià)值。 本論文將克隆的輪

2、狀病毒Vp4\Vp7基因的重組輪狀病毒多表位RE來(lái)替代熱不穩(wěn)定性腸毒素LT的A亞基的LTA1部分，與LT的A2亞基LTA2形成融合基因RE-LTA2，構(gòu)建了帶有信號(hào)肽的prlas-RE-LTA2\Ubpuitin-LTB雙價(jià)植物表達(dá)載體。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草，最終獲得表達(dá)重組蛋白的轉(zhuǎn)基因煙草。轉(zhuǎn)基因煙草植株經(jīng)PCR檢測(cè)分析表明，轉(zhuǎn)基因煙草植株基因組中可檢測(cè)到RE-LTA2\LTB融合基因：提取轉(zhuǎn)基因煙草植株總蛋白質(zhì)，通過(guò)Dot-EL

3、ISA、ELISA免疫檢測(cè)驗(yàn)證了轉(zhuǎn)基因植株表達(dá)的重組抗原有免疫原性。 將本實(shí)驗(yàn)室保存重組質(zhì)粒pBI121-Vp4、pBI121-Vp7根癌農(nóng)桿菌EHA105來(lái)侵染6-7日齡的雜花苜蓿下胚軸，經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，完成轉(zhuǎn)基因苜蓿植株的再生，得到抗性轉(zhuǎn)基因苜蓿植株。轉(zhuǎn)基因苜蓿植株經(jīng)PCR檢測(cè)分析表明，轉(zhuǎn)基因苜蓿植株基因組中可檢測(cè)到Vp4、Vp7基因；Dot-ELISA、ELISA免疫檢測(cè)驗(yàn)證了轉(zhuǎn)基因植株表