A群豬輪狀病毒OSU株VP7基因的克隆及其在桿狀病毒中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、該研究用恒河猴胚腎細(xì)胞（MA-104細(xì)胞系）繁殖并擴(kuò)增了A群PRV G5型標(biāo)準(zhǔn)毒株OSU.根據(jù)Genebank已發(fā)表的PRV VP7基因cNNA序列,利用Oligo4.1軟件設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物,通過(guò)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）擴(kuò)增出長(zhǎng)約1.0kb的基因片段,命名為VP7.將其克隆至PMD-18T載體,構(gòu)建了重組質(zhì)粒PMD-18T-VP7.對(duì)PMD-18T-VP7中進(jìn)行序列測(cè)定,并將測(cè)序結(jié)果同仔豬多發(fā)的其它四個(gè)G血清型代表毒株（G

2、9型ICB2185株、G10型P343株、G4型Gottfried株、G2型-C134株）及OSU-1株（參考序列）的VP7基因進(jìn)行了序列比較.與OSU-1株的核苷酸和氨基酸同源性分別為99.4﹪和99.7﹪.與其它四個(gè)毒株的核苷酸同源性分別為77.9﹪、71.7﹪、75.3﹪、87.7﹪;推導(dǎo)的編碼氨基酸同源性分別為83.1﹪、87.1﹪、84.7﹪、96.3﹪.VP7基因的真核表達(dá),為進(jìn)一步研究PRV VP7蛋白的結(jié)構(gòu)和功能,研制P

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