肝臟自然殺傷細胞在輪狀病毒致小鼠膽道閉鎖中的作用研究.pdf

1、目的:了解肝臟自然殺傷細胞(natural killer cell,NK)在輪狀病毒(rhesus rotavirus,RRV)致小鼠膽道閉鎖(biliary atresia,BA)中的作用。
　　方法:實驗動物C57BL/6(B6);TLR2基因敲除鼠[TLR2(-/-)];C57BL/10(B10);TLR4基因敲除鼠[TLR4(-/-)]。以上四種小鼠均購買自南京大學模式動物研究所。其中B6和TLR2(-/-)背景相同,B1

2、0和TLR4(-/-)背景相同。
　　1.動物實驗:選擇生后1d、7d及成年(6-8w)三個時間的四種小鼠,腹腔注射RRV后24h,用磁珠分選技術分選肝臟NK細胞,利用流式細胞術檢測肝NK細胞膜表面分子CD69表達水平,及NK細胞內腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和干擾素-γ(IFN-γ)的表達。分別進行基因敲除小鼠和野生型小鼠的比較和生后1d、7d、成年小鼠的比較。
　　2.細胞實驗:用非放射性細胞殺傷試劑盒檢測四種小鼠肝臟

3、NK細胞對小鼠肝外膽管上皮細胞的殺傷活性。
　　結果:1.腹腔注射RRV后,野生型小鼠NK細胞活化表達水平比同齡的TLR敲除小鼠明顯較高;
　　2.腹腔注射RRV后新生小鼠NK細胞活化較低;
　　3.野生型小鼠肝臟NK細胞比同齡的TLR基因敲除小鼠殺傷肝外膽管上皮細胞的百分率高;
　　4.HMGB1活化后小鼠肝NK細胞對小鼠肝外膽管上皮細胞的殺傷百分率較正常組高;小鼠肝NK細胞對感染RRV后小鼠肝外膽管上皮細胞的