一例漢族常染色體顯性遺傳性泛發(fā)性色素異常癥家系的臨床與分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、研究背景：遺傳性泛發(fā)性色素異常癥（Dyschromatosis universalis hereditaria，DUH）是一種罕見的遺傳性色素異常性皮膚病，于1933年由 Ichikawa和Hiraga首次報(bào)道。根據(jù)連鎖定位區(qū)域的不同，DUH可分為3種不同類型，即連鎖定位于6q24.2-q25.2染色體區(qū)域的DUH1(OMIM127500)，定位于12q21-q23區(qū)域的DUH2(OMIM612715)和定位于2q35區(qū)域的DUH3(O

2、MIM615402)。其中，DUH1和DUH3為常染色體顯性遺傳模式，而 DUH2呈常染色體隱性遺傳。常染色體顯性遺傳性泛發(fā)性色素異常癥主要累及軀干和四肢，患者通常在出生時(shí)或出生后1年內(nèi)泛發(fā)形狀、大小各異的色素沉著斑和色素減退斑。皮損不隨年齡的增長(zhǎng)而改變。部分患者還可伴有身材矮小、智力障礙、高頻耳聾、白內(nèi)障、癲癇等。迄今已報(bào)道ABCB6和SASH1基因突變與DUH發(fā)病相關(guān)。
　　目的：(1)對(duì)1例漢族常染色體顯性遺傳性泛發(fā)性色素異

3、常癥家系進(jìn)行臨床研究，探討DUH的臨床特征。（2）對(duì)該家系進(jìn)行ABCB6和SASH1基因突變檢測(cè)，探討此家系發(fā)病的分子遺傳學(xué)機(jī)制。
　　方法：(1)收集1例來(lái)自河南省的四代漢族人家系的臨床資料。對(duì)先證者進(jìn)行詳盡的臨床體格檢查、反射式共聚焦顯微鏡（Reflectance confocal microscopy，RCM）、皮膚組織病理檢查和Melan-A染色，明確DUH診斷；（2）然后采集8例該家系成員（5例患者，3例正常對(duì)照）及20

4、0例家系外無(wú)親緣關(guān)系的健康對(duì)照的外周抗凝血樣本，應(yīng)用Qiagen試劑盒提取基因組DNA；（3）應(yīng)用Primer Premier5.0軟件分別設(shè)計(jì)文獻(xiàn)已報(bào)道的2個(gè)DUH致病基因SASH1和ABCB6基因的全部外顯子及其兩側(cè)與內(nèi)含子交界區(qū)域的引物，應(yīng)用ABI3730XL測(cè)序系統(tǒng)對(duì)降落式 PCR擴(kuò)增的目的片段進(jìn)行直接Sanger測(cè)序檢測(cè)有無(wú)致病性突變；（4）最后，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)（Immunohistochemistry，IHC）探討先證

5、者皮損中SASH1蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）該 DUH家系符合常染色體顯性遺傳模式。家系中所有的患者均在出生后1年內(nèi)發(fā)病，皮損始于面部，后逐漸泛發(fā)于全身。皮損不隨年齡增長(zhǎng)而變化。體格檢查示：全身泛發(fā)不規(guī)則淡褐色至深褐色色素沉著斑，直徑約2-5mm，其中部分呈星芒狀。色素沉著之外的皮膚呈廣泛的色素減退。僅先證者的大姐表現(xiàn)為泛發(fā)性網(wǎng)狀色素沉著斑和色素減退斑?；颊叩恼契?、黏膜、指（趾）甲及牙齒均未受累，體格、精神及智力各方面均發(fā)

6、育正常。先證者RCM檢查示：色素沉著皮損基底層色素含量增多，呈高折光性，有多個(gè)明亮完整的色素環(huán)；色素減退皮損同一平面色素缺失，折光減弱或無(wú)折光性，色素環(huán)缺如或部分可見殘存色素環(huán)。先證者皮損組織病理學(xué)檢查示：表皮基底層黑色素增多或減少，真皮及皮下組織未見明顯改變。先證者色素沉著皮損處 Melan-A染色示表皮內(nèi)的樹突狀黑素細(xì)胞數(shù)量、分布正常；（2）Sanger測(cè)序結(jié)果示：家系中5例患者均檢測(cè)到SASH1基因雜合錯(cuò)義突變c.2236C>G(

7、p.Ser587Arg)，3例正常對(duì)照及家系外200例無(wú)親緣關(guān)系的健康對(duì)照均未檢測(cè)到此基因突變。SIFT和Polyphen-2預(yù)測(cè)軟件分析該點(diǎn)突變?yōu)橛泻ψ儺愇稽c(diǎn)；PyMol軟件蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)模擬發(fā)現(xiàn)該突變導(dǎo)致SASH1蛋白高度保守的SH3結(jié)構(gòu)域發(fā)生β/α的構(gòu)象改變。實(shí)驗(yàn)中所有樣本均未發(fā)現(xiàn)ABCB6基因突變；（3）SASH1單抗免疫組化示SASH1蛋白在先證者色素沉著皮損的基底層上皮細(xì)胞胞質(zhì)中有陽(yáng)性表達(dá)，而在色素減退皮損各層細(xì)胞中無(wú)表達(dá)。

8、r>　　結(jié)論：（1）常染色體顯性DUH的臨床特征是患者在1歲內(nèi)開始發(fā)病，皮損表現(xiàn)為全身泛發(fā)的不規(guī)則褐色色素沉著斑和色素減退斑，色素沉著斑周圍可呈彌漫性色素減退或與色素減退斑交織成網(wǎng)狀外觀。皮膚RCM和組織病理學(xué)檢查均顯示色素沉著斑處表皮基底層色素增多，而色素減退斑處表皮基底層色素減少。Melan-A染色顯示患者的表皮黑素細(xì)胞數(shù)量及分布正常。（2）SASH1基因上的雜合錯(cuò)義突變（c.2236C>G p.Ser587Arg）是該例常染色體顯