確炎舒松對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:從SD雌性大鼠骨髓中分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并研究不同濃度確炎舒松對(duì)體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞各種生物學(xué)特性的影響。
　　 方法:
　　 1.應(yīng)用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)4周齡雌性SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并鑒定。
　　 2.以不同藥物濃度(a:1×10-4mol/L，b:5×10-5mol/L，c:1×10-5mol/L，d:1×10-6mol/L，e:1×10-7mol/L，f:0 mol/L)干預(yù)培養(yǎng)，顯

2、微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
　　 3.以不同藥物濃度(abcdef)分別加入接種有BMSCs的96孔板中培養(yǎng)，另設(shè)一組只加培養(yǎng)基及相應(yīng)的DMSO，每種濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，24小時(shí)及48小時(shí)測(cè)定3孔對(duì)應(yīng)吸光度值，分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組增殖情況。
　　 4.以不同濃度確炎舒松(abcdef)分別加入接種細(xì)胞后的六孔板中培養(yǎng)48小時(shí)， Annexin V-FITC法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，并記錄數(shù)據(jù)。
　　 5.將BMSCs以適當(dāng)濃度接

3、種于若干六孔板中，()A組加入地塞米松(10-8M/L)+抗壞血酸(50ug/ml)+β磷酸甘油(10mmol/L)，()B組加入確炎舒松（10-6mol/L）+抗壞血酸(50ug/ml)+β磷酸甘油(10mmol/L)，() C組確炎舒松(10-6mol/L)，() D組加入抗壞血酸50ug/ml+β磷酸甘油10mmol/L，()E組不加任何藥物。
　　 每三天換液同時(shí)加入各自藥物培養(yǎng)21天，分別提取總RNA，應(yīng)用RT-PCR

4、擴(kuò)增OCN及β-actin，并進(jìn)行電泳，采取圖像進(jìn)行應(yīng)用quantity one軟件進(jìn)行灰度分析。
　　 6.將BMSCs以適當(dāng)濃度接種于若干六孔板中，分為ABCDE（同上）五組，每三天換液同時(shí)加入各自藥物培養(yǎng)21天后進(jìn)行茜素紅染色，觀察染色結(jié)果并拍照。
　　 結(jié)果:
　　 1.通過(guò)流式表面標(biāo)記物的鑒定及分化能力的檢測(cè)表明此次試驗(yàn)成功培養(yǎng)出大鼠骨髓間充值干細(xì)胞。
　　 2.與對(duì)照組相比，abcd組各組細(xì)胞

5、數(shù)量減少，形態(tài)改變，而e組的數(shù)量及形態(tài)未見(jiàn)明顯不同。
　　 3.各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行Dunnett-t檢驗(yàn)，除E組（培養(yǎng)48小時(shí)）組外，余P值均＜0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.流式細(xì)胞儀凋亡檢測(cè)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Dunnett-t檢驗(yàn)，除E組（10-7mol/L）外(P=1)，其余各組與對(duì)照組相比都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.電泳結(jié)果應(yīng)用quantity one軟件進(jìn)行灰度分析（等高線定量法），結(jié)果與對(duì)照組（

6、E組）相比， A、B組OCN表達(dá)變化與E組相比經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而C、D組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A、B組BMP-2表達(dá)變化與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C、D兩組BMP-2變化與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6.ABC三孔茜素紅染色陽(yáng)性，DE兩組茜素紅染色為陰性。
　　 結(jié)論:
　　 1.本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)全骨髓貼壁法成功分離培養(yǎng)出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　 2.本次實(shí)驗(yàn)10-6-10-4mol/L確炎舒松干預(yù)大鼠