亞洲璃眼蜱唾液腺兩個(gè)小肽分子的鑒定.pdf

1、唾液腺分子在蜱吸血和傳播病原過程中起著很重要的作用，如抗凝血、抗炎癥和抑制宿主免疫反應(yīng)，從而有利于病原傳播。本論文根跟據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的cDNA文庫(kù)數(shù)據(jù)，以亞洲璃眼蜱唾液腺吸血后表達(dá)差異的二個(gè)小肽分子Ha-11和P18為對(duì)象，進(jìn)行其功能鑒定。
　　亞洲璃眼蜱多肽Ha-11的編碼基因開放閱讀框(ORF)為372bp,編碼123個(gè)氨基酸，其中含23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽，生物信息學(xué)分析表明該多肽無高度同源性分子，為功能未知的唾液腺多肽。將去

2、除信號(hào)肽的編碼區(qū)基因亞克隆至pGEX-4T-1載體，大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)，獲得了37kDa重組蛋白?？怪亟MHa-11蛋白的免疫血清識(shí)別半飽血雌蜱的唾液腺中約11kDa的天然蛋白。Real-timePCR結(jié)果表明該基因在亞洲璃眼蜱的各發(fā)育階段、各組織中均有表達(dá)，但各發(fā)育階段中以若蜱表達(dá)量最高，而組織中以淋巴液表達(dá)量最高。重組蛋白在體外可以抑制脾細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。研究結(jié)果顯示Ha-11在蜱吸血過程中可能具有抗炎作用

3、。
　　亞洲璃眼蜱唾液腺多肽P18的編碼基因開放閱讀框架ORF為465bp，編碼154氨基酸，有一個(gè)16個(gè)氨基酸的信號(hào)肽。生物信息學(xué)分析表明該多肽無高度向源性分子，為功能未知的唾液腺多肽。利用表達(dá)載體P18/pET-32a/BL21表達(dá)蛋白，制備抗血清。WesternBlotting分析表明在唾液腺中以天然形式存在。Real-timePCR表明該基因在若蜱、唾液腺中大量表達(dá)。脾細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明，重組蛋白抑制脾細(xì)胞增殖并且抑制脾細(xì)胞