KATP通道開放劑對大鼠氣道平滑肌細胞增殖中Th1-Th2失衡的調節(jié)作用.pdf

1、目的:氣道平滑肌細胞增殖是導致哮喘氣道重構的重要原因。有研究顯示,ATP敏感性鉀通道開放劑能糾正哮喘氣道重塑,但其機制是否與氣道平滑肌細胞增殖有關,并未有系統(tǒng)性的研究報道。本課題就KATP通道開放劑對哮喘氣道重塑的作用機制做出發(fā),研究氣道平滑肌細胞增殖過程中,TGF-β1分泌釋放水平與細胞因子信號轉導抑制蛋白3/5(SOCS3/5)的表達和Th1/Th2細胞分化的特異性細胞因子的關系,希望為尋找有效的哮喘治療藥物和治療靶點提供實驗性的依

2、據。
　　方法:(1)從大鼠體內分離、提取原代氣道平滑肌細胞(ASMCs),建立平滑肌細胞增殖的細胞模型:Western blotting檢測增殖型ASMCs中的α-SMA表達;ELISA法檢測增殖后上清液中TGF-β1的釋放。(2)增殖型ASMCs和大鼠脾臟淋巴細胞體外共培養(yǎng):采用流式細胞儀檢測Th1、Th2分化表達情況;Real-timePCR檢測淋巴細胞中SOCS3mRNA及SOCS5mRNA的表達。(3) KATP通道開放

3、劑藥物干預、處理共培養(yǎng)細胞體系,并設立對照:檢測藥物作用前后Th免疫平衡和SOCS表達變化。
　　結果:(1)成功提取大鼠氣道平滑肌細胞,并采用免疫細胞化學染色鑒定細胞。(2)AngⅡ促進ASMCs轉化為增殖型,Western blotting檢測α-SMA的表達增加,ELISA檢測TGF-β1表達升高。(3)增殖型ASMCs和淋巴細胞體外共培養(yǎng)模型中,流式細胞檢測結果顯示增殖型的AMSCs促進CD4+T細胞由Th1向Th2分化,

4、Th2優(yōu)勢應答,IL-4表達升高,Th1型細胞因子IFN-γ減少,Th1/Th2平衡失調。(4)KATP通道開放劑處理共培養(yǎng)體系后,與對照相比,上清液中TGF-β1含量降低;Th1/Th2免疫平衡指標顯示結果與用藥前相比有明顯差異,并具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。(5)Real-timePCR檢測淋巴細胞中SOCS3/5mRNA用藥前后表達同樣差異顯著(P<0.05或P<0.01)。
　　結論:以上實驗結果推測AS