HOXD10基因在肝癌中表觀遺傳學改變及其對該基因表達的調(diào)控.pdf

1、背景：肝細胞癌(HCC)的發(fā)病率在惡性腫瘤中位居世界第五位，死亡率位居惡性腫瘤第三位，每年被確診的HCC患者大約為564，000例。相關(guān)研究表明HCC的發(fā)病機制涉及表觀遺傳學和遺傳學的改變，與二者關(guān)系密切。HOXD10基因定位于2q31.1。HOXD10蛋白作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，影響著機體多種不同的分子生物學過程，例如細胞凋亡，分化，細胞動力學和血管形成等。已有研究表明HOXD10基因在乳腺癌、胃癌和子宮內(nèi)膜癌等腫瘤中表達缺失，恢復表達HO

2、XD10可抑制乳腺癌、胃癌和垂體泌乳素瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等功能。在原發(fā)性濾泡淋巴瘤和胃癌中HOXD10啟動子區(qū)發(fā)生甲基化而導致基因表達缺失。但尚未有關(guān)于HOXD10在HCC中的表觀遺傳學變化的報道。
　　 目的：本研究的主要目的是檢測HOXD10基因在肝細胞癌組織中的甲基化狀態(tài)，并探討HOXD10在肝癌中的表達是否受甲基化調(diào)控。
　　 方法：本次研究選取4株HCC細胞系，它們分別為HBxF344、Bel-7402、PL

3、C/PRF/5和HepG2，皆由中國人民解放軍總醫(yī)院消化科提供。55例原發(fā)性肝細胞癌組織和5例正常肝組織皆取自中國人民解放軍總醫(yī)院。運用甲基化特異性PCR(MSP)方法，檢測HOXD10基因在這4株細胞系中的甲基化狀態(tài)。應用具有抑制甲基轉(zhuǎn)移酶功能的5-aza-2-deoxycytidine（5-Aza-dC）處理HBxF344、Bel-7402、PLC/PRF/5和HepG2這4株肝癌細胞系，運用半定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測這

4、4株細胞系在藥物處理前后，細胞內(nèi)的HOXD10在mRNA水平的變化情況。最后用MSP方法檢測肝細胞癌組織和正常肝組織標本內(nèi)的HOXD10基因的甲基化狀態(tài)，并結(jié)合組織標本臨床資料，應用X2檢驗分析甲基化和各項臨床指標的關(guān)系。
　　 結(jié)果：HOXD10基因在HBxF344、Bel-7402、PLC/PRF/5和HepG24株肝癌細胞系中均發(fā)生完全甲基化，且HOXD10的表達在這4個細胞株中均缺失，經(jīng)甲基化酶抑制劑5-Aza-dC處理

5、后HOXD10基因在這4個細胞系中均恢復表達。以上實驗結(jié)果提示HOXD10基因的表達受到甲基化的調(diào)控。55例肝細胞癌組織標本中41例發(fā)生甲基化改變，甲基化率約為75％，而在5例正常肝組織樣本中均未發(fā)現(xiàn)HOXD10基因發(fā)生甲基化變化(0％)。HOXD10的甲基化改變與肝癌患者的年齡，性別，病理分期和分化程度等因素之間無明顯的相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：HOXD10基因的啟動子區(qū)高甲基化是肝細胞癌的多發(fā)事件，甲基化在肝細胞