復(fù)合載藥微球殼聚糖溫敏凝膠的初步研究.pdf

1、目的:
　　 牙周病是最常見(jiàn)的口腔疾病之一，在世界范圍內(nèi)均有較高的患病率。牙周病治療的最終目的是實(shí)現(xiàn)牙周組織的再生，形成牙周新附著。近年來(lái)，人們認(rèn)識(shí)到生長(zhǎng)因子的應(yīng)用在牙周組織再生中發(fā)揮著的重要作用。但是，外源性生長(zhǎng)因子易流失、易失活，難以長(zhǎng)期高效釋放，在目前的實(shí)際應(yīng)用中，外源性生長(zhǎng)因子的治療效果并不理想。如果能利用合適載體負(fù)載目標(biāo)生長(zhǎng)因子，發(fā)揮生長(zhǎng)因子的應(yīng)用潛能，則應(yīng)用外源性生長(zhǎng)因子有望成為實(shí)現(xiàn)牙周組織再生的最貼近臨床的有效手段

2、。
　　 殼聚糖溫敏凝膠制備條件溫和，且具有良好的生物相容性，可用作為敏感性的蛋白藥物、生物半衰期短的藥物、口服不穩(wěn)定藥物以及全身毒副作用較大的藥物等多種特殊藥物的載體。雖然殼聚糖凝膠體系在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的多個(gè)方向已經(jīng)有所建樹(shù)，但它存在著一些自身的缺點(diǎn)，如力學(xué)性能較差，對(duì)一些小分子藥物的緩釋效果不夠好。為了解決此問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)在殼聚糖溫敏凝膠中加入納米微球等粒子，形成復(fù)合載藥微球殼聚糖溫敏凝膠體系，并對(duì)該體系的性能進(jìn)行研究。

3、　　 方法:
　　 本實(shí)驗(yàn)利用離子凝膠法制備殼聚糖納米微球(Chitosan Microsphere，CMS)，即在殼聚糖(Chitosan，CS)溶液中，加入多聚磷酸鈉(Tripolyphosphate，TPP)，使殼聚糖的游離氨基與TPP陰離子發(fā)生分子間或分子內(nèi)交聯(lián)反應(yīng)，從而制備殼聚糖球狀凝膠。研究制備得到的殼聚糖微球的表面形態(tài)、粒徑分布等理化性質(zhì)。以牛血清蛋白(Bovine serum albumin，BSA)為藥物模型

4、，研究制備微球的條件改變（CS濃度、BSA濃度、TPP濃度）對(duì)CMS包封率和載藥量的影響，以及CMS對(duì)BSA的體外緩釋效果。
　　 制備殼聚糖溫敏凝膠（Chitosan/β-glycerophosphate，CS/β-GP體系），即在冰浴條件下，向CS溶液中逐滴加入β-甘油磷酸鈉(β-glycerophosphate，β-GP)，直至渾濁，37℃水浴溫箱中數(shù)分鐘可得殼聚糖溫敏凝膠。研究β-GP/CS的配比、溶液的pH值及溫度等因

5、素對(duì)CS/β-GP體系各項(xiàng)特性指標(biāo)的影響（凝膠狀態(tài)、凝膠化時(shí)間），研究CS/β-GP體系作為蛋白類藥物（BSA蛋白）緩釋載體的體外緩釋效果。
　　 將干燥的CMS加入到制備好的CS/β-GP體系溶膠中，攪拌混合均勻后在37℃水浴溫箱中數(shù)分鐘可得復(fù)合載藥微球殼聚糖溫敏凝膠（CS/β-GP/CMS體系），并且研究不同因素對(duì)CS/β-GP/CMS體系凝膠性質(zhì)的影響（凝膠狀態(tài)、凝膠化時(shí)間），研究該體系作為藥物緩釋載體的體外緩釋效果。

6、r>　　 結(jié)果:
　　 1.當(dāng)CS濃度在0.6～2.0mg/ml，TPP濃度在0.5～1.0mg/ml之間時(shí)均可生成CSM。掃描電鏡下觀察，可見(jiàn)CMS分散較好，粒徑均勻;表面光滑，無(wú)皺褶;所得微球的粒徑為10～500nm。載藥后CMS的粒徑有所增大，且邊緣形狀不太規(guī)則。CMS對(duì)BSA蛋白的包封率和載藥量隨著CS濃度的增加而增大;隨著B(niǎo)SA溶液濃度的增大，CSM對(duì)BSA的包封率是逐漸減小的，而對(duì)BSA的載藥量是增加的;TPP濃度

7、的改變對(duì)BSA的包封率影響較小。在體外釋放實(shí)驗(yàn)中，隨著CS濃度的增加，CMS在藥物釋放初期6h內(nèi)釋放的藥量也會(huì)增加，從45％增加到了62％，在后期都呈現(xiàn)了緩慢釋放的跡象，48h內(nèi)釋放的藥量超過(guò)80％。
　　 2.CS/β-GP體系的凝膠化的時(shí)間與β-GP/CS的配比、溶液的pH值及溫度有密切的關(guān)系。β-GP/CS體積配比為0.2的58％β-GP/2％CS，pH=6.9的混合液，常溫時(shí)可持續(xù)保持液相，30min內(nèi)未出現(xiàn)凝膠化，當(dāng)溫

8、度升高至37℃時(shí)，凝膠化時(shí)間為2.5min。在體外緩釋實(shí)驗(yàn)中，CS/β-GP體系對(duì)BSA有明顯的緩釋作用，不同載藥濃度(2，4，6mg/ml)CS/β-GP體系的體外釋藥效果差別不大，具有相似的釋藥規(guī)律，前20h釋放較快，分別達(dá)到47％、50％、54％，100h基本釋放完全，最終累計(jì)釋放率分別為75％、78％、81％。
　　 3.CS/β-GP/CMS體系較CS/β-GP體系凝膠化時(shí)間由2.5 min縮短為1.5 min，凝膠強(qiáng)

9、度也有所增強(qiáng)。CS/β-GP體系和CS/β-GP/CMS體系對(duì)BSA均存在一定程度的緩釋，CMS的加入明顯減慢了BSA在凝膠中的釋放速率，CS/β-GP/CMS體系對(duì)BSA24h累計(jì)釋放率分別為16％，緩釋時(shí)間長(zhǎng)達(dá)14d，累計(jì)釋放率為75％;而CS/β-GP體系24h累計(jì)釋放率高達(dá)70％，4d總累計(jì)釋放率為82％。
　　 結(jié)論:
　　 1.利用離子凝膠法制備CMS，當(dāng)CS濃度為2mg/ml、BSA濃度為1.5mg/ml、