EB病毒感染胃上皮AGS細(xì)胞的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)是一種致瘤病毒，已證明多種人類惡性腫瘤如Burkitt's淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌和胃癌等與EBV感染相關(guān)。EBV感染能導(dǎo)致一系列的細(xì)胞效應(yīng)，尤其是宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成途徑在病毒侵入后出現(xiàn)明顯變化。因此，在EBV感染和未感染細(xì)胞之間就出現(xiàn)了蛋白表達(dá)譜的差異，而這些差異蛋白正是病毒感染細(xì)胞、細(xì)胞抵御病毒的具體執(zhí)行者，尋找并鑒定這些蛋白將對(duì)認(rèn)識(shí)EBV感染機(jī)制提供大量的研究線索。本研究運(yùn)用

2、比較蛋白組技術(shù)對(duì)EBV感染胃上皮AGS細(xì)胞前后出現(xiàn)的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行分析，初步探索病毒—宿主相互作用，對(duì)于進(jìn)一步闡明EBV的感染機(jī)制及EBV在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用和機(jī)制具有十分重要的意義。
　　本論文由三部分組成:第一章前言概述了EB病毒感染與胃癌的相關(guān)性，以及比較蛋白質(zhì)組學(xué)在病毒學(xué)的研究現(xiàn)狀。本課題將比較蛋白質(zhì)組學(xué)與病毒學(xué)相結(jié)合，并提出本課題的研究方向。
　　第二章EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞系的建立，培養(yǎng)及鑒定:采

3、用cell-to-cell感染法建立EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞系，并通過(guò)原位雜交及電子顯微鏡對(duì)EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞系進(jìn)行驗(yàn)證性檢測(cè)。原位雜交和電鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)均可檢測(cè)到EBV EBER-1的表達(dá);在EB病毒感染的胃上皮AGS細(xì)胞的胞漿內(nèi)存在明確的EB病毒顆粒。
　　第三章EB病毒感染AGS的比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析為了分析感染病毒后宿主細(xì)胞蛋白表達(dá)譜的變化，本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)技

4、術(shù)對(duì)EBV感染和未感染的AGS細(xì)胞進(jìn)行了比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析。結(jié)果顯示，在EBV感染AGS細(xì)胞后共有11個(gè)蛋白點(diǎn)的表達(dá)水平發(fā)生了至少2.0倍的上調(diào)或下調(diào)變化。在這些差異表達(dá)蛋白中，我們用質(zhì)譜(MALDI-TOF和LC-ESI-IT MS)成功鑒定出9種蛋白質(zhì)，對(duì)應(yīng)于5個(gè)上調(diào)表達(dá)和4個(gè)下調(diào)表達(dá)蛋白質(zhì)。5個(gè)上調(diào)表達(dá)蛋白質(zhì)是:熱休克同源71 kDa蛋白(heat shock cognate71 kDa protein)，細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白-1(ac

5、tin cytoplasmic1)，吡多辛-5-磷酸鹽氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase)，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase9)，T復(fù)合物蛋白1亞單位α(t-complex protein1 subunit alpha);4個(gè)下調(diào)表達(dá)蛋白是:鋅指蛋白-2(zinc finger protein2)，細(xì)胞周期素依賴性激酶-2（cyclin-dependent kinase2），巨噬細(xì)胞加帽蛋白

6、(macrophagecapping protein)，生長(zhǎng)分化因子-11（growth/differentiation factor11）。
　　為了檢驗(yàn)蛋白質(zhì)組研究結(jié)果，我們選取細(xì)胞周期素依賴性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9進(jìn)行了Western-Blot驗(yàn)證。結(jié)果顯示:細(xì)胞周期素依賴性激酶-2在EBV感染的胃上皮AGS細(xì)胞組中下調(diào)表達(dá);同時(shí)，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染的胃上皮AGS細(xì)胞組中上調(diào)表達(dá)。這些結(jié)果表

7、明兩種蛋白的變化趨勢(shì)與雙向凝膠電泳中兩種蛋白點(diǎn)變化趨勢(shì)一致，進(jìn)一步證明了本研究的蛋白組學(xué)結(jié)果正確。
　　在我們所發(fā)現(xiàn)的差異蛋白中，下調(diào)表達(dá)的細(xì)胞周期素依賴性激酶-2是細(xì)胞周期中的重要調(diào)控因子之一，我們推測(cè):EBV可能通過(guò)改變細(xì)胞周期調(diào)控，引起細(xì)胞周期紊亂，而導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖。上調(diào)表達(dá)的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9是細(xì)胞凋亡的重要的起始因子。我們推測(cè):EBV感染AGS細(xì)胞以后，細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)可能是宿主細(xì)胞對(duì)病毒的防御機(jī)制之一。